[发明专利]一种多溴联苯同系物免疫原及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫原及其制备方法，尤其是涉及一种多溴联苯同系物免疫原及其制备方法。

背景技术

溴系阻燃剂是目前世界上产量最大的有机阻燃剂之一，其中主要是多溴联苯醚(PBDEs)和多溴联苯(PBBs)类物质，常作为阻燃添剂加入树脂、聚苯乙烯和聚氨酯泡沫等高分子合成材料中，广泛地应用于塑料制品、纺织品、电路板和建筑材料等领域，并随着这些产品的使用，慢慢逸散到环境中。

多溴联苯和多氯联苯化学性质类似，是一种在环境中非常稳定而且容易形成生物积累的化学品，关于多溴联苯的生物毒性的认识这几年也有很大发展。由PBBs和PBDEs蓄积作用而造成的环境、食品污染问题已引起欧盟、美国等发达国家高度关注，欧盟电子电器设备中有害物质的限制指令(ROHS)指令所涉及的有害物质包括阻燃剂(Flame Retardants)-多溴联苯(PBBs)和多溴联苯醚(PBDEs)。目前环保组织关于PBDE和PBBs的研究主要集中在水体、土壤、大气等环境领域和生物体的毒性方面，样品的前处理过程、净化过程和分析过程都存在较大的差异。因此，开展研究并建立有效、可靠的含溴阻燃剂的检测方法及标准，并通过相关的法规予以保障，成为一项极为重要和迫切的工作。

免疫分析是基于抗原抗体特异性识别和结合反应为基础的分析方法。免疫分析具有特异性强、灵敏度高(检测限可达10^-6～10^-9g)、方便快捷、分析容量大、分析成本低、安全可靠等优点。一般不需要贵重仪器，可大大简化甚至省去前处理过程，对使用人员的专门技术要求不高，容易普及和推广。

对于多溴联苯的免疫监测方法的建立，国内迄今为止还没有见到相关的报道。这可能由于多溴联苯同系物的种类繁多，而且，PBBs同系物的物理、化学、生物和毒物学的性质不同。因此有关前沿研究要求PBBs的分析必须由测定总量的水平提高到测定同类物和异构体的水平上来，因此单个PBBs同系物的定性和定量分析是十分必要的。

因此，多溴联苯同系物及其衍生物的制备对其毒理学性质，迁移转化，生态效应等研究具有重要意义。多溴联苯半抗原以及免疫原的制备是采用免疫方法测定多溴联苯的基础，对于建立多溴联苯单体的监测方法，具有重要的应用价值和理论研究意义。

当前市场上销售的多溴联苯单体不多，更没有见到有关能和大分子蛋白质形成免疫原的多溴联苯半抗原衍生物分子，因此，关于多溴联苯类环境污染物的免疫检测方法的研究至今还未见报道。对于多溴联苯免疫监测方法的建立，高纯度合适的半抗原是制备具有高灵敏度和特异性免疫原和高效价抗体的根本。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种步骤简单，速度快，产率高的多溴联苯同系物免疫原及其制备方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种多溴联苯同系物免疫原，该免疫原的结构式如下：

其结构和纯度可以通过元素分析，核磁共振，紫外光谱等检测手段分析鉴定。

一种多溴联苯同系物免疫原的制备方法，包括以下步骤：

(1)PBB28半抗原4-(4，4′-二溴联苯基)-4氧-丁酸的合成：

制备路线如下：

将丁二酸酐、4，4’-二溴联苯溶解于非质子性溶剂中，冰浴搅拌，无水三氯化铝在冰水浴条件下投料，在1-2h内分次加入，无水三氯化铝滴加完毕后撤去冰水浴，在常温条件下，隔水密封搅拌10-14h，薄层法监测反应原料点消失后，加稀盐酸终止反应。有机层用稀盐酸水洗并旋转蒸发除去有机溶剂，得黄色固体粉末粗品，经过重结晶，干燥，得到PBB28半抗原4-(4，4′-二溴联苯基)-4氧-丁酸；

(2)PBB28人工免疫原PBB28-BSA的制备：

制备路线如下：

在0-5℃的条件下，将溶有N-羟基琥珀酰亚胺和N，N′-二环己基碳酰亚胺的有机溶液逐滴加入溶有PBB28半抗原的有机溶液中，搅拌反应6-12h，4℃过夜，将离心分出的上层活化酯加入到pH为6.8-7.4，溶有牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲溶液中，0-4℃的冰浴中反应4-6h，离心得到上清液，将上清液转移到半透膜中，在pH为6.8-7.4的磷酸盐缓冲溶液或0.9％生理盐水透析5天，即得PBB28人工免疫原(PBB-BSA偶联物)，经柱提纯，加入等量甘油-20℃下或者冻干保存。

步骤(1)中所述的非质子性有机溶剂为二氯甲烷或硝基苯。