[发明专利]一种海带配子体克隆培育方法

权利要求书

1.一种海带配子体克隆培育方法，其步骤是：

(1)剪取种海带块：剪取带有成熟孢子囊的种海带块；

(2)种海带块的预处理：用灭菌脱脂棉蘸取经制冷至10℃的煮沸消毒海水，对带有成熟孢子囊的种海带块进行充分擦洗；

(3)种海带块的消毒：在无菌室超净工作台内，预处理过的种海带块首先用无菌双抗海水浸泡30分钟，然后用1.5％浓度的碘化钾无菌海水溶液浸泡10分钟，最后用无菌海水浸泡20分钟；

(4)游孢子的放散、过滤：在无菌室超净工作台内，用无菌镊子夹取灭菌消毒后的种海带块，快速移入装有无菌海水的血清瓶中进行游孢子放散，放散后的无菌海水成为含有游孢子的孢子水，孢子水经筛绢过滤，滤出粘液及杂质；

(5)游孢子的附着和培养：在无菌室超净工作台内，过滤后的孢子水倒入装有载玻片的立式染色缸中，当游孢子附着于载玻片上形成胚孢子后，倒掉孢子水，加入无菌双抗海水，使载玻片完全浸泡在无菌双抗海水中，然后用酒精灯烤干立式染色缸的缸口后，盖上染色缸盖，在立式染色缸口外侧用封口膜拉伸封口进行培养即可得到发育成雌、雄可辨的配子体，再用微吸管将单个雌雄配子体分别分离至两个不同的血清瓶中，每个血清瓶分别用无菌双抗海水进行培养，即可得到单细胞的海带配子体克隆团。

2.根据权利要求1所述一种海带配子体克隆培育方法，其特征在于：在步骤(4)中，所述筛绢为400目的经过高温高压灭菌的筛绢。

3.根据权利要求1所述一种海带配子体克隆培育方法，其特征在于：在步骤(5)中，所述无菌双抗海水中含有有效氮、有效磷、青霉素和链霉素，有效氮浓度为10ppm，有效磷浓度为1ppm，青霉素浓度为120ppm，链霉素浓度为100ppm。

4.根据权利要求1所述一种海带配子体克隆培育方法，其特征在于：在步骤(5)中，所述培养条件是温度8～10℃，持续光照并且光照强度为800～1200lux。

5.根据权利要求1所述一种海带配子体克隆培育方法，其特征在于：所述无菌海水、1.5％浓度的碘化钾无菌海水和无菌双抗海水均在无菌室超净工作台内，经0.22um滤膜抽滤。