[发明专利]免疫测定试剂、生物传感器和检测分析物的方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2011年11月4日提交的韩国专利申请No.10-2011-0114524的权益、以及由其产生的全部权益，其因此通过引用引入，如同在本文中全面阐述一样。

技术领域

本公开内容涉及免疫测定试剂、生物传感器、和测定(assay)分析物的方法，其可使用鱼精蛋白以高度灵敏的方式测定样品中存在的分析物。

背景技术

生物化学结合测定广泛用于确定生物样品中包含的分析物的存在和浓度。这样的测定基于结合配偶体(binding partners)的原理。所关心的分析物与分析物结合剂(例如对所述分析物的抗体或对所述分析物的受体)结合，且所述分析物和所述分析物结合剂因此称作“结合配偶体”。当所述结合配偶体之一结合至固相时，所述测定称作“非均相测定”。这样的非均相测定包括例如夹层法、间接法和竞争法，所有术语都是本领域容易理解的。

测定的灵敏度典型地是指当与在缺乏分析物的情况下得到的信号读取相比时在通过测定产生的信号中产生统计学显著变化的分析物的最小质量。增加的灵敏度是期望的，因为其容许检测更小量的分析物以及分析物的总体更高精度的测量。

非特异性结合是指在具有固相的非均相测定体系中结合配偶体的非特异性相互作用。非特异性结合经常降低非均相测定的灵敏度，且因此期望减少这样的非特异性结合。

仍需要容许以高度灵敏的方式检测分析物的免疫测定试剂、生物传感器和测定方法。

发明内容

本文中所公开的提供用于分析物的高度灵敏的检测的免疫测定试剂，其中所述免疫测定试剂包括(a)包括所述分析物和纤维蛋白原(血纤蛋白原，fibrinogen)的样品、及(b)鱼精蛋白。所公开的还提供生物传感器，其包括：(a)基底，对分析物特异性的捕获抗体固定至所述基底；(b)免疫测定试剂，其包括(i)包括所述分析物和纤维蛋白原的样品、及(ii)鱼精蛋白；和(c)对所述分析物特异性的检测抗体。

所公开的进一步提供测定分析物的高度灵敏的方法，包括：制备包括(i)包括所述分析物和纤维蛋白原的样品、及(ii)鱼精蛋白的免疫测定试剂；向所述免疫测定试剂添加检测抗体以提供检测抗体-分析物复合物(complex)；将所述检测抗体-分析物复合物与固定在基底上的捕获抗体接触以提供检测抗体-分析物-捕获抗体复合物；和检测所述分析物。

所公开的进一步提供用于检测分析物的方法，包括：制备包括(i)包括所述分析物和纤维蛋白原的样品、及(ii)鱼精蛋白的免疫测定试剂；将所述免疫测定试剂与固定在基底上的捕获抗体接触以提供捕获抗体-分析物复合物；将所述捕获抗体-分析物复合物与检测抗体接触以提供捕获抗体-分析物-检测抗体复合物；和检测所述分析物。

附图说明

以下参照附图进一步详细地描述示例性实施方式。可理解，为了清楚可已放大所述附图的各方面：

图1是金染色(gold staining)测定的示意图；和

图2是酶联免疫吸附测定的示意图。

具体实施方式

本文提供的是包括(a)包括所关心的分析物和纤维蛋白原的样品、及(b)鱼精蛋白的免疫测定试剂、以及使用所述试剂检测分析物的方法。不希望受任何特定理论或作用机理束缚，据信在样品例如血液样品中纤维蛋白原的存在降低基于结合配偶体的分析物检测方法的灵敏度和/或特异性(specificity)。进一步据信对于这样的测定的非特异性结合、或其它干扰模式可通过如下减少：在检测前将所述样品与鱼精蛋白组合以提供免疫测定试剂。更具体地，据信改善的性能是由于鱼精蛋白与所述样品中存在的纤维蛋白原的静电相互作用，由此显著改善所述分析物的测定的灵敏度和再现性。

根据所公开的一个方面，所述分析物为肌钙蛋白I，且所公开的提供测定肌钙蛋白I的高度灵敏的方法。

在本说明书中，术语“肌钙蛋白I(TnI)”是指与肌钙蛋白T和肌钙蛋白C一起通常存在于肌肉组织中的蛋白质。肌钙蛋白I调节肌动蛋白和肌球蛋白的钙依赖性相互作用。肌钙蛋白I的的三种同种型已被鉴别：慢缩(slow-twitch)骨骼肌亚型肌钙蛋白I、快缩(fast-twitch)骨骼肌亚型肌钙蛋白I和心肌肌钙蛋白I。当与其它肌钙蛋白比较时，心肌肌钙蛋白I在N-末端具有31个额外的氨基酸残基且为心肌中存在的唯一肌钙蛋白亚型。