[发明专利]一种以大肠杆菌外膜孔蛋白OmpW为靶点筛选药物的方法

权利要求书

1. 一种以大肠杆菌外膜孔蛋白OmpW为靶点筛选药物的方法，其特征在于，所述方法包括下列步骤：

（1）基因的克隆及重组载体的构建；

（2）重组载体的转化、筛选和诱导表达得外膜孔蛋白OmpW高表达菌；

（3）以高表达菌的外膜孔蛋白OmpW为靶点进行细胞水平的药物筛选，用50~80μg/ml的待筛选化合物作用于高表达菌，培养0.5-1h，采用Western-blot分析检测高表达菌的外膜孔蛋白OmpW的表达量变化，OmpW的表达量降低，待筛选化合物具有药物作用，OmpW的表达量不变或增加，待筛选化合物不具有药物作用。

2.根据权利要求1所述的一种以大肠杆菌外膜孔蛋白OmpW为靶点筛选药物的方法，其特征在于：步骤（1）中利用大肠杆菌K12的ompW基因序列设计合成引物，引物合成后，以大肠杆菌K12基因组DNA为模板扩增基因ompW，经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定并回收目的基因，利用T4-DNA连接酶将目的基因与载体连接得重组载体。

3.根据权利要求2所述的一种以大肠杆菌外膜孔蛋白OmpW为靶点筛选药物的方法，其特征在于，所述载体为质粒或粘粒载体。

4.根据权利要求1或2或3所述的一种以大肠杆菌外膜孔蛋白为靶点筛选药物的方法，其特征在于：步骤（2）中筛选是指采用氨苄青霉素抗性平板筛选外膜孔蛋白OmpW表达量高的菌株，诱导表达是指将外膜孔蛋白OmpW表达量高的菌株培养至对数生长期，加入IPTG诱导得到相应的外膜孔蛋白OmpW高表达菌。

5.根据权利要求3所述的一种以大肠杆菌外膜孔蛋白OmpW为靶点筛选药物的方法，其特征在于：诱导剂IPTG的浓度为0.3~0.4mmol/l。