[发明专利]一种猪支原体肺炎雾化活疫苗及其制备与检验方法

说明书

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种疫苗及其制备与检验方法，具体涉及一种猪支原体肺炎雾化活疫苗及其制备与检验方法。

背景技术

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体感染引起的一种接触性慢性呼吸道传染病。本病遍布全球，并且易与其它病原发生混合感染，引起更严重的肺部病变，产生更大的经济损失。疫苗免疫是预防该病的主要方法。目前市场上可供选择的疫苗主要分为进口灭活疫苗和国产弱毒疫苗。猪支原体肺炎灭活疫苗免疫后由于不能阻制猪肺炎支原体野毒对支气管纤毛的定植，因此无法产生完全的保护。猪支原体肺炎活疫苗(168株)是国内唯一一个大量推广使用的弱毒疫苗，临床使用效果显著，实验室的攻毒保护试验表明，其保护效率要高于进口灭活疫苗，然而该活疫苗目前所采用肺内注射免疫途径不利于大规模推广。若能将猪支原体肺炎活疫苗制成雾化剂型，则不仅能提高疫苗接种的方便性，而且大大节省了劳动力和劳动时间，达到更好推广免疫该疫苗的目的。

由于猪鼻甲骨与气管解剖结构的特点，只有粒径为1～10μm的微粒经气雾以适当的角度可以进入下呼吸道。较粗的颗粒大部分落在上呼吸道鼻腔黏膜上，无法对疫苗起到靶向作用。如果微粒太细(＜0.5μm)，则进入肺泡囊后又随呼气排出，所以必须将猪支原体肺炎雾化活疫苗的粒径控制在1～10μm内。本发明在气溶液胶的发生方式与发生设备上对之进行了控制。

气溶胶在发生方式上总体可分为物理凝集法、化学凝集法、机械分散法和气流分散法。对于微生物气溶胶，具有严格的选择性，一般常用气流分散法进行。而液相气流分散法又可细分为水力式、吹气式、离心式、振动式和超声波法等等。考虑到本发明既需要在单位时间内喷出较多量的疫苗气溶胶，而且气溶胶粒子谱范围不能太大，我们最终选择吹气式雾化法和水力式雾化法作为雾化活疫苗的制备方法。另外，由于雾化过程中所产生的切削力、高压力等均会对微生物的活性产生影响，然而，控制气溶胶微粒大小和疫苗活力本身又是一种矛盾。气溶胶生成过程中的切削力、高压力越大，雾化粒子越小，但疫苗株的活力也越低。因此，在制备猪支原体肺炎雾化活疫苗时，必须加入一定的保护剂，以减少雾化过程所产生的各种作用力对疫苗的损伤。除了切削力、高压力等作用力外，影响气溶胶微生物活力的因素还有环境因素，如在低湿、高温环境下，雾化疫苗中水份快速蒸发，盐代谢失调和急剧的干燥作用、氧化作用使雾化疫苗活力大大降低。因此，为保持雾化疫苗的微生物学活性，本发明在制备雾化疫苗时，综合考虑了雾化疫苗的发生方法、疫苗溶液的组成以及环境因素等。

发明内容

本发明的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种猪支原体肺炎雾化活疫苗及其制备与检验方法，本发明将猪支原体肺炎活疫苗制成雾化剂型，则不仅能提高疫苗接种的方便性，而且大大节省了劳动力和劳动时间，达到更好推广免疫该疫苗的目的。

其技术方案为：

一种猪支原体肺炎雾化活疫苗，包含有以下组分：疫苗菌株、疫苗稀释液，

所述疫苗菌株为猪肺炎支原体弱毒株(168株)的冻干菌种或新鲜培养的菌液；

所述疫苗稀释液为pH值6.8-7.5，且终浓度为含5-10％甘油的去离子水溶液，或含0.1-1‰丙二醇嵌段聚醚(F68)的去离子水溶液，或含0.1％聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)的去离子水溶液，或者为上述保护剂的任意组合。

进一步优选，所述保护剂组合为终浓度为含5％甘油、0.1％聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)的去离子水溶液。

一种猪支原体肺炎雾化活疫苗的制备方法，包括以下步骤：

1)用疫苗稀释液溶解冻干的疫苗菌株，或稀释新鲜培养的菌液，配制成猪支原体肺炎活疫苗溶液，并使该疫苗溶液的pH值为6.8-7.5，其中所含甘油的终浓度为5-10％，或含丙二醇嵌段聚醚(F68)的终浓度为0.1-1‰，或含聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)的终浓度为0.1％，疫苗菌种或菌液与疫苗稀释液的配制比例为1∶1～1∶100；

2)将步骤1)所得的猪支原体肺炎活疫苗溶液通过吹气式雾化法或水力式雾化法制成雾化活疫苗。

所述猪支原体肺炎雾化活疫苗粒径在1-10μm之间，且保持一定的活性，雾化活疫苗的滴度相比活疫苗溶液的滴度应控制为降低1个滴度以内。

步骤2)中所述的吹气式雾化法所用喷雾设备应为医用下呼吸道沉积型喷雾器，或喷雾粒度直径可控制在1-10μm之间的电动喷雾器。

步骤2)中所述的水力式雾化法所用的喷雾设备应为喷雾粒度直径可控制在1-10μm之间的高压喷雾降温系统。