[发明专利]一种高富硒钝顶螺旋藻的培养及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种应用于保健食品、医药领域的高富硒钝顶螺旋藻的培养及其方法。

背景技术

螺旋藻是至今为止发现的营养最丰富、最全面的绿色食品，尤其蛋白质含量较高，氨基酸平衡，还含有丰富的必需脂肪酸(如r一亚麻酸等)，其中藻蓝蛋白是螺旋藻含量最高的生物活性物质之一，可达藻体质量的20％左右，具有良好的抗氧化、抗肿瘤等作用。

硒是人体必需的微量元素之一, 其生理功能主要表现为硒蛋白和硒酶的抗氧化作用。我国通过人群补硒成功防治了多种疾病, 如克山病、大骨节病、心血管病、肝病及肿瘤等。利用生物转化途径生产具有较高生物活性的有机硒可避免无机硒的毒性, 并可协同天然活性分子的功能。因此, 利用生物体富集有机硒的研究受到广泛关注。而螺旋藻（Spirulina）易于大规模培养，作为硒生物有机化的载体前景将十分广阔。

何晓燕报道当亚硒酸钠浓度小于100mg/L时, 对藻体生长有一定的促进作用, 其生物量、藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白含量有增加, 藻体硒含量及富硒系数有所增高。黄峙等也研究了加硒方式对藻体富硒的影响，在温度33～35℃，光照强度4000lx,光照时间24h,分步加硒，而且当亚硒酸钠为300mg/L时，得到总硒含量为0.46mg/g的螺旋藻体。同时研究表明不同种类的螺旋藻在不同的培养条件下具有不同的富硒能力。

而市场上有机硒的来源有限，目前已经开发比较成熟的是富硒量较高的富硒酵母，陈福生等研究表明富硒酵母中中总硒含量为1.895mg/g,但酵母本身营养价值较低，而螺旋藻本身极具营养价值且对无机硒的耐受能力较强，而富硒大米，富硒茶有报道含硒量为20-300μg/kg.同时市场上保健品如灵芝孢子分价格比较昂贵，因此迫切需要开发出低成本，高营养价值、高免疫力的高富硒的螺旋藻保健品。

鉴于以上研究，本发明探索了易于操作、成本低廉并且富硒量及有机硒含量较高的富硒螺旋藻培养及其检测方法。

发明内容  

    本发明的目的是获得高富硒的螺旋藻培养及其检测方法，以便开发出营养价值高、免疫力强的高有机硒的螺旋藻保健品，进一步提高使用者的免疫力。

为了实现上述目的本发明采用如下技术方案：

一种高富硒钝顶螺旋藻的培养方法，其特征在于在温度20～25℃、pH 8～10、光照强度2000～2500 lx、每天24h光照中培养，采用Zarrouk培养液，放在三角培养瓶中培养，接种密度为OD₅₆₀ = 0.25～0.35，分次添加Na₂SeO₃至总硒量达270-300mg/L，待OD₅₆₀为1.2～1.5时收集藻体，冷冻干燥，制得高富硒钝顶螺旋藻。

高富硒钝顶螺旋藻的培养方法，包括以下步骤：将钝顶螺旋藻放在250ml的三角培养瓶中，采用Zarrouk培养液，在温度20～25℃、pH 8～10、最佳光照强度2000-2500lx、每天24h光照中培养，接种密度为OD₅₆₀ = 0.25～0.35，接种体积150ml,然后放在光照培养箱中，当OD₅₆₀为0.7～0.8时第一次加Na₂SeO₃ 13.5mg-15mg,当藻液OD₅₆₀为0.8-0.9时第二次添加Na₂SeO₃ 13.5mg-15mg，当藻液OD₅₆₀为0.9-1.0时第三次添加Na₂SeO₃13.5mg-15mg继续培养，待OD₅₆₀为1.2-1.5时收集钝顶螺旋藻，培养周期为11-13d，用蒸馏水洗2-3次钝顶螺旋藻，冷冻干燥后制得高富硒钝顶螺旋藻。

高富硒钝顶螺旋藻的检测方法，包括以下步骤：用原子荧光光谱法检测总硒及有机硒的含量；

（1）总硒测定：

取0.5g富硒螺旋藻，加9-11ml消化液摇匀后，所述的消化液为浓硝酸：高次氯酸=4:1配置得到，放置过夜，置于电热板上加热至有机物分解或色泽加深，补加1～3ml消化液继续消化，控制温度低于200℃，如此反复至消化液澄清，有HClO₄白烟冒出，继续加热至溶液1～3ml，用60%浓HCL定容在25ml容量瓶中，然后加0.5%NaBH₄至反应终点，用AFS-3100型双道原子荧光光度计测量总硒含量；

（2）无机硒的测定：