[发明专利]一种高富硒钝顶螺旋藻的培养及其检测方法

权利要求书

1.一种高富硒钝顶螺旋藻的培养方法，其特征在于在温度20～25℃、pH 8～10、光照强度2000～2500 lx、每天24h光照中培养，采用Zarrouk培养液，放在三角培养瓶中培养，接种密度为OD₅₆₀ = 0.25～0.35，分次添加Na₂SeO₃至总硒量达270-300mg/L，待OD₅₆₀为1.2～1.5时收集藻体，冷冻干燥，制得高富硒钝顶螺旋藻。

2.根据权利要求1所述的高富硒钝顶螺旋藻的培养方法，其特征在于包括以下步骤：将钝顶螺旋藻放在250ml的三角培养瓶中，采用Zarrouk培养液，在温度20～25℃、pH 8～10、最佳光照强度2000-2500lx、每天24h光照中培养，接种密度为OD₅₆₀ = 0.25～0.35，接种体积150ml,然后放在光照培养箱中，当OD₅₆₀为0.7～0.8时第一次加Na₂SeO₃ 13.5mg-15mg,当藻液OD₅₆₀为0.8-0.9时第二次添加Na₂SeO₃ 13.5mg-15mg，当藻液OD₅₆₀为0.9-1.0时第三次添加Na₂SeO₃13.5mg-15mg继续培养，待OD₅₆₀为1.2-1.5时收集钝顶螺旋藻，培养周期为11-13d，用蒸馏水洗2-3次钝顶螺旋藻，冷冻干燥后制得高富硒钝顶螺旋藻。

3.一种检测权利要求书1或2所述的高富硒钝顶螺旋藻的检测方法，其特征在于包括以下步骤：用原子荧光光谱法检测总硒及有机硒的含量；

（1）总硒测定：

取0.5g富硒螺旋藻，加9-11ml消化液摇匀后，所述的消化液为浓硝酸：高次氯酸=4:1配置得到，放置过夜，置于电热板上加热至有机物分解或色泽加深，补加1～3ml消化液继续消化，控制温度低于200℃，如此反复至消化液澄清，有HClO₄白烟冒出，继续加热至溶液1～3ml，用60%浓HCL定容在25ml容量瓶中，然后加0.5%NaBH₄至反应终点，用AFS-3100型双道原子荧光光度计测量总硒含量；

（2）无机硒的测定：

     取0.5g富硒螺旋藻，加10ml～20ml的蒸馏水，置于加热板上加热沸腾20min～30min，冷却离心，保存上清液，残渣再重复一次操作，合并上清液，上清液进行和总硒测定同样的方法消化测定，按4:1加消化液摇匀后，放置过夜，置于电热板上加热至有机物分解或色泽加深，补加1-2ml消化液继续消化，控制温度低于200℃，如此反复至消化液澄清，有HClO₄白烟冒出，继续加热至溶液1-2ml，用60%浓HCL定容在25ml容量瓶中，然后加0.5%NaBH₄至反应终点，用AFS-3100型双道原子荧光光度计测量无机硒含量，然后总硒减去无机硒即是有机硒；

（3）硒及氨基酸相对含量检测方法：

将0.2g藻粉放在共振盘上，通过手握传感器测定样品的微磁场的频率和能量，经仪器放大，计算机处理后和设与仪器内部的营养指标的标准“量子共振谱”比较，输出相应的由负到正的相对量价值。