[发明专利]一种猪用亚洲I型口蹄疫病毒灭活疫苗佐剂及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种疫苗用佐剂，特别是一种兽用疫苗的佐剂。确切讲本发明涉及一种猪用亚洲I型口蹄疫病毒灭活疫苗的佐剂及制备方法，这种佐剂中有重组猪白介素2（Porcine Interleukine-2，pIL-2）。 

背景技术

佐剂是一种先与抗原或与抗原混合后同时注入到人或动物体内，能够增强机体对该抗原的特异性免疫应答，发挥辅助作用的物质。佐剂是疫苗的主要组成成分，在疫苗的质量提高和改进中扮演着重要的作用。 

白介素2（Interleukine-2，IL-2）是一种多种功能的细胞因子，能够通过自分泌或旁分泌形式作用于一些细胞的表面，从而启动机体内细胞的信号通路，发挥免疫调节作用。IL-2是由T细胞产生的多功能的活性糖蛋白，能够促进T、B淋巴细胞的增殖；增强细胞毒T细胞的杀伤活性；促进免疫球蛋白的产生；刺激许多免疫细胞产生多种细胞因子；能够增强机体的细胞和体液免疫应答。近年来研究表明，IL-2可提高机体对疫苗的免疫应答和控制疾病的发生。可应用于多种疫苗中作为免疫增强剂，如猪口蹄疫疫苗、流感疫苗、狂犬病疫苗、疱疹病毒疫苗等。国外学者报道了单次或多次注射重组牛IL-2对BHV-1副流感病毒二联苗及牛病毒腹泻病毒苗的作用，结果表明单次或多次注射均可增强两种疫苗的免疫效果，但是多次注射效果会更好。这些研究表明重组IL-2作为疫苗分子佐剂，不仅能够高效特异地调节机体对疫苗的反应，而且可调节体液和细胞免疫应答（lofthouse S A, et al,1996）。然而重组蛋白用于疫苗佐剂也存在以下的缺点：半衰期较短，易受内外环境的影响而活性降低，需要多次注射；另外，一次性大剂量的使用还可导致发热、炎症等副作用，这都给细胞因子重组蛋白在临床实践应用中带来不便。 

发明内容

本发明提供一种含有重组猪白介素2的猪用亚洲I型口蹄疫病毒灭活疫苗佐剂，本佐剂克服现有重组pIL-2作为疫苗佐剂的不足，而且具有安全、高效、廉价的优点；同时提供一种这种佐剂的制备方法。 

本发明的一种猪用亚洲I型口蹄疫病毒灭活疫苗佐剂，这种佐剂是由猪白介素2被一种脂质基质和乳化剂包裹构成的粒径为50-1000nm的纳米颗粒。 

本发明的猪用亚洲I型口蹄疫病毒灭活疫苗佐剂所用的脂质基质为氢化蓖麻油，所用的乳化剂为聚乙丙交脂和聚乙烯醇，所用的猪白介素2为酵母表达系统表达的重组蛋白。 

本发明的猪用亚洲I型口蹄疫病毒灭活疫苗佐剂是由10重量份的氢化蓖麻油和2重量份的聚乙丙交脂包裹0.5-1重量份的重组pIL-2。 

本发明的佐剂可用于亚洲I型口蹄疫病毒灭活抗原混合物构成的亚洲亚洲I型口蹄疫病毒灭活疫苗。 

本发明的佐剂的制备方法采用了复乳溶剂挥发法制备。一种具体的制备方法是：将100mg的氢化蓖麻油和20mg的聚乙丙交脂溶于1mL的三氯甲烷中作为有机相，将该有机相加热到30-40℃；纯化后的重组pIL-2溶于pH=8的磷酸缓冲液中，使终浓度为20mg-50mg/ml；取200μL的前述液体为水相，然后在充分搅拌条件下把水相缓慢加入到前述的有机相中，冰浴中超声形成（w/o）相的乳液，将制备好的该乳液加入到5mL的1%的聚乙烯醇水溶液中，进一步的利用乳化仪乳化形成（w/o/w）相的乳液，再在室温下充分搅拌，使有机溶剂完全挥发，固化得到聚合物纳米粒分散体系，加入5-10倍体积的灭菌水收集纳米粒，并用3～5mL的蒸馏水重悬，冷冻干燥获得所要的佐剂。 

本发明实际上是一种固体脂质纳米粒（Solid Lipid Nanoparticle，SLN）。SLN是一类以固态天然或半合成类酯（如卵磷脂）、脂肪酸（如硬脂酸）或甘油三脂等广义脂质为载体原料，利用不同方法制成粒径为50-1000nm的固态胶粒给药体系。与脂质体和微乳相比目前的产物由于被包封于SLN的固体骨架中而实现了更好的控释和缓释效果；其最突出的优点在于它具有固态基质，这样可以保护化学性质不稳定的物质不被分解破坏，并可以调节药物的释放。由于在制备过程中蕴含了大规模生产的基础，使SLN更具有吸引力。