[发明专利]一种定量检测降钙素原PCT的胶乳增强免疫比浊试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种采用胶乳增强免疫比浊法定量检测人体血液中降钙素原PCT的试剂盒。

背景技术

降钙素原（procalcitonin，PCT）为降钙素CT的前体物质，由116个氨基酸组成，分子量13kD，由N末端-降钙素-C末端三部分组成，其结构稳定，不受体内激素水平的影响，在人体内的半衰期为25-30小时，具有良好稳定性。体内产生PCT的主要部位在肝脏，其他如外周血单核细胞、脾、肺或小肠的神经内分泌细胞也是产生PCT的重要场所。内毒素、细胞因子可刺激PCT的释放。

PCT作为一种临床标志物，具有独特的优势。PCT在健康人血液中含量极低（＜0.05ng/ml），0.5ng/ml被认为是全身性感染（脓毒症）诊断的分界值。PCT在脓毒症患者中浓度显著增高，可达1000ng/ml。PCT与炎症的严重程度成正比，在SIRS（系统炎症反应综合征）、脓毒症（败血症）、严重脓毒症（败血症）及脓毒症（败血症）休克病人中PCT浓度有明显差异。PCT可在感染2小时后检测到，在感染后12-24小时达到高峰，在炎症消失后恢复正常。PCT在体内、外稳定性好，不受慢性炎症或自身免疫疾病影响，不受临床用药影响（OKT3除外），对于系统性细菌感染和脓毒症等具有高度敏感性和特异性。

临床研究表明，PCT检测在不同医学领域对多种疾病的诊断和治疗有很高的价值，可应用于ICU、血液科、肿瘤科、儿科、早产儿及新生儿监护室、外科、内科、器官移植科、急诊科和治疗实验室等众多科室。与目前所应用的诊断指标相比，PCT在鉴别诊断和控制感染及严重炎症方面提供了额外的信息，涉及下列多种疾病的诊断、治疗项目：对败血症、系统性严重细菌感染（腹膜炎或软组织感染等）做早期诊断；对败血症和SIRS作鉴别诊断、细菌感染和非细菌性炎症反应（自身免疫性疾病等）的鉴别诊断、细菌感染和病毒感染的鉴别诊断（脑脊膜炎等）、器官移植术后鉴别诊断（细菌感染、病毒感染、排斥反应、真菌感染等）、对不明原因发烧（UFO）诊断及对特殊感染高危患者（重症监护室、器官移植术后、免疫抑制期）监测、脓毒性休克和非脓毒性休克的鉴别诊断。PCT与其他细菌感染的传统诊断指标，如：白细胞计数、血沉、C反应蛋白、细菌培养等比较，可实现早期、快速、更高的灵敏度和特异性；作为判断病情与预后以及疗效观察的可靠指标更有助于医生及时准确了解患者的疾病状况，跟进疾病的进程，准确预后以及对治疗方法进行指导，为制定合理的抗生素应用方案提供依据，减少患者不必要的医疗支出和防止抗生素的滥用。

目前，检测PCT的方法有很多，不仅可以定性，亦可以定量，常用的方法有：凝胶层析及高效液相色谱分析、酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）、放射免疫测定（Radioimmunoassay，RIA）、免疫发光法和胶体金层析法。其中，凝胶层析及高效液相色谱分析费时且不易自动化；ELISA法定量准确性差、操作时间长、自动化程度低，多用于定性检测；RIA法既能检测游离PCT，又能检测结合型PCT，也可检测降钙素基因相关前体（Pro-CGRP），此法可信敏感度为4pg/ml，能检测正常人血清PCT，较双抗夹心法敏感，RIA缺点是所需时间较长，检测结果不稳定，重复性比ELISA差，且存在放射性污染危险。金标方法虽稳定性较好，但灵敏度较低，一般只能定性，不能定量，特别是重复性差这一缺点限制了其在临床上的应用，尤其不适用于需通过准确定量来帮助对疾病进行诊断的体液标志蛋白的定量检测。免疫发光法采用两个抗原特异性抗体分别结合在PCT的不同位点。一株抗体是光标记（示踪物），而另一株则结合于试管内壁的包被物上。在孵育过程中，抗体与标本中的降钙素原分子结合形成夹心复合物，而光标抗体则结合于试管表面的包被物。反应完成后，清洗，将过剩的示踪物弃去，应用适当的光度计和发光检测试剂测量光信号，计算结合到管壁包被物上的剩余示踪物的量。光信号强度与PCT浓度成正比。应用已知的抗原浓度建立标准曲线，通过它就可求得血清或血浆中未知的PCT浓度。该方法特异性强，敏感性高，但需要昂贵的仪器设备和经验丰富的操作人员，一般多在特定医疗机构使用。