[发明专利]一种A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及脑膜炎奈瑟菌的检测，具体是一种A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒及其制备方法。

背景技术

脑膜炎奈瑟菌是一种革兰氏阴性双球菌，通过呼吸道传染引起的流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）是一种对人类危害严重的传染性疾病，此外还可引起菌血症、肺炎、关节炎、结膜炎、心肌炎、泌尿系统等多种炎症，是一种常见和多发疾病。脑膜炎奈瑟球菌可分为A、B、C、D、H、I、K、L、X、Y、Z、29E和W135共13个血清群，对人类致病的多属A、B、C群，其他类群在带菌者中经常发现，但很少致病。我国的流脑流行菌群仍以A群为主，但近年来也发人群中的绝大多数人对脑膜炎奈瑟球菌易感，该菌可寄生于正常人的鼻咽腔内，处于这种寄生状态的细菌并不导致任何病理变化，亦不引起任何疾病症状；但这种带菌状态可以持续l周到数月之久，这种处于潜伏感染状态的带菌者在人群中的比例可高达50%～85%。人群中的带菌者是造成流行性脑脊髓膜炎流行的最重要的传染源，由于脑膜炎奈瑟菌的惟一自然宿主是人，因此，在人群较为密集的场所，容易造成细菌的高效率的传播，特别是在儿童、中小学生为最易感人群，极易在短时间内造成儿童发病流行，所以，控制人群中的带菌者传染源成为控制流脑流行的重要环节之一。

目前国内市场上脑膜炎奈瑟菌的各种免疫诊断试剂盒质量参差不齐，既无统一的质量标准，又在无序生产与应用，给脑膜炎奈瑟菌的预防和诊治造成严重障碍。目前虽有国外试剂商提供同类商品化诊断试剂盒用于检测，但是此种试剂盒价格十分昂贵，限制了临床的广泛使用。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题和缺陷，本发明的目的是提供一种A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒及其制备方法，即可用于脑膜炎奈瑟菌全菌的定性和定量的检测。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒，由A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板、标本稀释液、酶标二抗、洗涤液、底物液、终止液构成，具体组份为：

(1)、标本稀释液：含10%小牛血清和2%抗人IgG的0.01M、pH7.4的磷酸盐缓冲液；

(2)、洗涤液：含有0.05%Tween20的磷酸盐缓冲液；

(3)、酶标二抗：辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgM单抗；

(4)、底物液：TMB-H000尿素溶液；

(5)，终止液：2mol/LH₂S0₄溶液；

所述A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板通过如下步骤制得：

(1)、在96孔酶标板的每孔内加入0.1MNaHC0₃稀释的5%戊二醛200uL，于37℃温箱中放置80-90分钟，然后用去离子水洗涤96孔酶标板3-5次，甩干，备用；

(2)、将A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌等体积混合后，用包被液按1：1000～1100的体积比稀释后，包被处理后的96孔酶标板，每孔95-105ul；然后于37℃温箱中烘干10-18小时；

(3)、取过夜烘干的抗原包被96孔酶标板用200uL用PBS稀释的10%小牛血清的填满，然后于35-38℃下封闭1-2小时，即得抗原包被酶标反应板；

其中，所述的A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌的浓度为3×l0⁹cfu/mL。

制备上述A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒的方法，包括制备A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板和配置其标本稀释液、酶标二抗、洗涤液、底物液、终止液；其中：

所述A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板通过如下步骤制得：

(1)、在96孔酶标板的每孔内加入0.1MNaHC0₃稀释的5%戊二醛200uL，于37℃温箱中放置80-90分钟，然后用去离子水洗涤96孔酶标板3-5次，甩干，备用；

(2)、将A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌等体积混合后，用包被液按1：1000～1100的体积比稀释后，包被处理后的96孔酶标板，每孔95-105ul；然后于37℃温箱中烘干10-18小时；

(3)、取过夜烘干的抗原包被96孔酶标板用200uL用PBS稀释的10%小牛血清的填满，然后于35-38℃下封闭1-2小时，即得抗原包被酶标反应板；

其中，所述的A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌的浓度为3×l0⁹cfu/mL。