[发明专利]一种A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒，其特征在于：它由A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板、标本稀释液、酶标二抗、洗涤液、底物液、终止液构成，具体组份为：

标本稀释液：含10%小牛血清和2%抗人IgG的0.01M、pH7.4的磷酸盐缓冲液；

洗涤液：含有0.05%Tween20的磷酸盐缓冲液；

酶标二抗：辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgM单抗；

底物液：TMB-H000尿素溶液；

终止液：2mol/LH₂S0₄溶液；

所述A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板通过如下步骤制得：

1)、在96孔酶标板的每孔内加入0.1MNaHC0₃稀释的5%戊二醛200uL，于37℃温箱中放置80-90分钟，然后用去离子水洗涤96孔酶标板3-5次，甩干，备用；

2)、将A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌等体积混合后，用包被液按1：1000～1100的体积比稀释后，包被处理后的96孔酶标板，每孔95-105ul；然后于37℃温箱中烘干10-18小时；

3)、取过夜烘干的抗原包被96孔酶标板用200uL用PBS稀释的10%小牛血清的填满，然后于35-38℃下封闭1-2小时，即得抗原包被酶标反应板；

其中，所述的A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌的浓度为3×l0⁹cfu/mL。

2.一种制备权利要求1所述的A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒的方法，包括制备A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板和配置其标本稀释液、酶标二抗、洗涤液、底物液、终止液；其特征在于：：

所述A、C型脑膜炎奈瑟菌抗原包被酶标反应板通过如下步骤制得：

(1)、在96孔酶标板的每孔内加入0.1MNaHC0₃稀释的5%戊二醛200uL，于37℃温箱中放置80-90分钟，然后用去离子水洗涤96孔酶标板3-5次，甩干，备用；

(2)、将A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌等体积混合后，用包被液按1：1000～1100的体积比稀释后，包被处理后的96孔酶标板，每孔95-105ul；然后于37℃温箱中烘干10-18小时；

(3)、取过夜烘干的抗原包被96孔酶标板用200uL用PBS稀释的10%小牛血清的填满，然后于35-38℃下封闭1-2小时，即得抗原包被酶标反应板；

其中，所述的A型脑膜炎奈瑟菌和C型脑膜炎奈瑟菌的浓度为3×l0⁹cfu/mL。

3.根据权利要求2所述的制备A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒的方法，其特征在于：所述的标本稀释液中2%抗人IgG的0.01M、pH7.4的磷酸盐缓冲液是由NaCl8.0g、KH₂P0₄0.2g、Na₂HP0₄.12H₂02.9g、KC10.2g、硫柳汞0.lg，加双蒸水至l000mL，调至pH7.4制得。

4.根据权利要求2所述的制备A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒的方法，其特征在于：所述的洗涤液是由NaCl8.0g、KH₂P040.2g、Na₂HP0₄.12H₂02.9g、KC10.2g、Tween-200.5ml、硫柳汞0.lg、加双蒸水至l000ml，调至pH7.4制得。

5.根据权利要求2所述的制备A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒的方法，其特征在于：所述的底物液是经200mg3、3’、5、5’一四甲基联苯胺、l00ml无水乙醇、加双蒸水至1000ml得底物液A；Na₂HP0₄14.60g、柠檬酸9.33g、0.75%过氧化氢尿素6.4ml、加双蒸水至l000ml，调至pH5.0~5.5得底物液B；将底物液A和底物液B按1：1～1.5的体积比混合制得。

根据权利要求2所述的制备A、C型脑膜炎奈瑟菌酶联诊断试剂盒的方法，其特征在于：所述的终止液是由l00ml浓硫酸缓慢滴加引入600ml双蒸水中不断搅拌，然后加双蒸水至900ml制得。