[发明专利]一种制备猪去氧胆酸的工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备猪去氧胆酸的工艺，具体利用盐析、甲酯化和重结晶原理从提取胆红素的下脚料（或猪胆汁)中制备医药猪去氧胆酸的新工艺方法，属于生物制药领域。

技术背景

猪去氧胆酸（Hyodeoxycholic Acid，HDCA）是广泛存在于动物胆汁中的一种生化物质，含量为0.1%~0.2%，分子式为C₂₄H₄₀O₄，分子量为392.58。其略溶于醇，微溶于丙酮，极微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。我国猪胆资源丰富，猪胆汁中主要含胆汁酸类、胆色素、粘蛋白、脂类及无机物等，胆汁酸则主要包含猪去氧胆酸、猪胆酸、鹅去氧胆酸、3α-羟基-6-氧代-5α-胆烷酸以及胆石酸等。在其中猪去氧胆酸约占40%，鹅去氧胆酸约占25%。国内许多企业都把从猪胆汁中提取胆红素后的物质作为废弃物，但是如果能利用提取胆红素后的母液分离提取猪去氧胆酸，既可以充分利用原料，提高猪胆汁的利用率，又可以增加经济效益。

HDCA是从猪胆汁中提取的一种胆烷酸，其具有降低血中胆固醇和甘油三酯、镇痉、祛痰作用，为人工牛璜的重要成分；临床上用于治疗高血脂症、气管炎以及由肝胆疾病引起的消化不良。本品对金黄色葡萄球菌、白喉杆菌、百日咳菌等有抑制作用，其作为清开灵注射剂中的有效成分，经临床观察对急性白血病的治疗有良好作用，体外实验证明其具有诱导细胞凋亡、抑止细胞的增殖分裂作用。HDCA作为治疗冠心病药物的研究，通过药理试验，其有降压、降血液中胆固醇的作用，临床试用也有明显的作用。HDCA主要从猪胆汁中提取，其提取工艺分为皂化（猪胆汁酸经强碱水解）和精制，目前猪去氧胆酸的精制途径大致分两条：一是脱色、脱水、浓缩、干燥；二是甲酯化、与苯加成、用苯分离得加成物、用碱水解、调pH、干燥，最终得到较纯的猪去氧胆酸。

目前该产品其他提取纯化工艺所得的产品纯度低、使用溶剂毒性较大、回收率低、成本高等问题，这就要求有一种新方法出现来解决这些问题。

发明内容

本发明的目的是为了改进现有技术的不足，提供了一种制备猪去氧胆酸的工艺。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种制备猪去氧胆酸的工艺，其具体步骤如下：

（1）盐析：将提取胆红素的下脚料作为原料，加入反应釜中，再向反应釜中加水，用酸溶液调节pH至2.0～4.0，温度控制在15～25℃之间，边搅拌边加入盐，连续搅拌，抽滤，得滤饼；

（2）碱液水解：将步骤（1）中的滤饼加入反应釜中，再加入碱液进行水解，水解时间为30～60min，以酸溶液酸化至刚果红变蓝，静置，抽滤，得到滤饼；

（3）吸附脱色：将步骤（2）中得到的滤饼加入反应釜中，再向反应釜中加入有机溶剂和活性炭，加热至65～80℃，冷凝回流30～60min；冷却至20～30℃，抽滤，得滤液，向滤液中加入脱水剂，脱水15～24h；抽滤，滤液旋蒸，浓缩至原体积的1/3～2/3，静置结晶，过滤收集晶体，真空干燥，得到猪去氧胆酸粗品；

（4）甲酯化：取猪去氧胆酸粗品溶于有机溶剂中，加入浓硫酸进行酯化，于15～25℃下搅拌36～48h，调节pH至6.8～7.2，继续搅拌1～2h；进行抽滤，滤饼用有机溶剂洗涤2～3次，合并滤液及洗液，减压蒸去有机溶剂，得到棕色粘稠状物；并经过TLC监测；

（5）柱层析：湿法装柱；将步骤（4）中所得棕色粘稠状物加入硅胶柱中；用洗脱剂进行梯度洗脱，收集洗脱液，经过TLC监测；再进行减压浓缩，得到淡黄色粘稠状固体；

（6）水解：将步骤（5）所得淡黄色粘稠状固体加入反应釜中，加入碱和水，用酸溶液调节pH至刚果红变蓝，抽滤，收集沉淀，水洗至流出液无色，得猪去氧胆酸；

（7）纯化：将步骤（6）所得猪去氧胆酸加入有机溶剂中，在机械搅拌条件下加热至有机溶剂水溶液完全沸腾，待猪去氧胆酸溶解后，分次加入水，继续搅拌，待温度降至10～20℃，再机械搅拌30～60min，进行抽滤，得到猪去氧胆酸晶体；

（8）真空干燥：将步骤（7）中的晶体用恒温真空度干燥箱进行干燥，即得猪去氧胆酸纯品。

优选在步骤（1）中所述的水的用量为3～6mL/g原料量；调节pH所用的酸溶液为HCl或H₂SO₄溶液；所用盐为NaCl或者Na₂SO₄，盐的用量为0.3～0.4g/mL水的用量；连续搅拌的时间为30～60min。