[发明专利]一种制备猪去氧胆酸的工艺

权利要求书

1.一种制备猪去氧胆酸的工艺，其具体步骤如下：

（1）盐析：将提取胆红素的下脚料作为原料，加入反应釜中，再向反应釜中加水，用酸溶液调节pH至2.0～4.0，温度控制在15～25℃之间，边搅拌边加入盐，连续搅拌，抽滤，得滤饼；

（2）碱液水解：将步骤（1）中的滤饼加入反应釜中，再加入碱液进行水解，水解时间为30～60min，以酸溶液酸化至刚果红变蓝，静置，抽滤，得到滤饼；

（3）吸附脱色：将步骤（2）中得到的滤饼加入反应釜中，再向反应釜中加入有机溶剂和活性炭，加热至65～80℃，冷凝回流30～60min；冷却至20～30℃，抽滤，得滤液，向滤液中加入脱水剂，脱水15～24h；抽滤，滤液旋蒸，浓缩至原体积的1/3～2/3，静置结晶，过滤收集晶体，真空干燥，得到猪去氧胆酸粗品；

（4）甲酯化：取猪去氧胆酸粗品溶于有机溶剂中，加入浓硫酸进行酯化，于15～25℃下搅拌36～48h，调节pH至6.8～7.2，继续搅拌1～2h；进行抽滤，滤饼用有机溶剂洗涤2～3次，合并滤液及洗液，减压蒸去有机溶剂，得到棕色粘稠状物；并经过TLC监测；

（5）柱层析：湿法装柱；将步骤（4）中所得棕色粘稠状物加入硅胶柱中；用洗脱剂进行梯度洗脱，收集洗脱液，经过TLC监测；再进行减压浓缩，得到淡黄色粘稠状固体；

（6）水解：将步骤（5）所得淡黄色粘稠状固体加入反应釜中，加入碱和水，用酸溶液调节pH至刚果红变蓝，抽滤，收集沉淀，水洗至流出液无色，得猪去氧胆酸；

（7）纯化：将步骤（6）所得猪去氧胆酸加入有机溶剂中，在机械搅拌条件下加热至有机溶剂水溶液完全沸腾，待猪去氧胆酸溶解后，分次加入水，继续搅拌，待温度降至10～20℃，再机械搅拌30～60min，进行抽滤，得到猪去氧胆酸晶体；

（8）真空干燥：将步骤（7）中的晶体用恒温真空度干燥箱进行干燥，即得猪去氧胆酸纯品。

2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：步骤（1）中所述的水的用量为3～6mL/g原料量；调节pH所用的酸溶液为HCl或H₂SO₄溶液；所用盐为NaCl或者Na₂SO₄，盐的用量为0.3～0.4g/mL水的用量；连续搅拌的时间为30～60min。

3.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：步骤（2）中所述碱液为NaOH或KOH的水溶液，浓度为0.35～0.45g/mL，用量为2～3mL/g湿滤饼的量；酸化所用酸溶液为HCl或H₂SO₄溶液；静置时间为1～2h。

4.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：步骤（3）中所述有机溶剂为乙酸乙酯或丙酮，有机溶剂的用量为3～5mL/g滤饼量；活性炭和滤饼的质量比为0.06～0.09：1；脱水剂为无水硫酸钠或无水硫酸镁，脱水剂的用量为0.2～0.3g/mL有机溶剂的量。

5.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：步骤（3）和（8）中所述的真空干燥箱的温度均为60～80℃；真空度均为-0.075～-0.01MPa；干燥时间均为12～24小时。

6.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于：步骤（4）中溶解猪去氧胆酸粗品的有机溶剂和洗涤滤饼所用的有机溶剂均为甲醇或乙醇；溶解猪去氧胆酸粗品所用的有机溶剂量为5～8mL/g猪去氧胆酸粗品量；浓硫酸的浓度为96%～99%，用量为0.05～0.15mL/g猪去氧胆酸粗品量；用来调节pH的是无水NaHCO₃；TLC监测过程中所用的展开剂为V_乙酸乙酯：V_石油醚：V_甲酸=4.8～5.2：4.8～5.2：0.8～1.2，0.9～1.0%磷钼酸乙醇溶液显色。