[发明专利]一种5'-核糖核苷酸水解酶检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人5’-核糖核苷酸水解酶的检测试剂盒。

背景技术

5’-核糖核苷酸水解酶是5’-次黄嘌呤核苷酸分解代谢过程中关键作用的酶，它能催化5’-次黄嘌呤核苷酸降解为次黄嘌呤核苷，而后经核苷磷酸化酶催化成次黄嘌呤，最终氧化成代谢产物尿酸。

5’-核糖核苷酸水解酶是一种特殊的水解酶，能特异性的水解5’-核苷酸连接于戊糖的5’-磷酸，生成核苷和磷酸。广泛存在于肝脏和各种组织中，其活性增高主要见于肝胆系统疾病，如阻塞性黄疸、原发及继发性肝癌等。

正常成人血清5’-核糖核苷酸水解酶活性无男女区别，但在老年人随年龄的增加而增加，尤其以女性增加最为明显，儿童期血清5’-核糖核苷酸水解酶活性与成年人一致。5’-核糖核苷酸水解酶增高主要见于肝胆疾病，尤其是阻塞性黄疸，也可见于肝癌和肝炎。

5’-核糖核苷酸水解酶测定的方法很多，但大多都不稳定，反应易受外源性干扰，不适于常规检验。

发明内容

本发明的目的是提供一种5’-核糖核苷酸水解酶的检测试剂盒。该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。

本发明的另一目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。

为实现上述目的，本发明提供的试剂盒组成为：

1.甘氨酸缓冲液、2.显色剂、3.嘌呤核苷磷酸化酶、4.黄嘌呤氧化酶、5.过氧化物酶、6. 5’-次黄嘌呤核苷酸、7. 4-氨基安替比林溶液。

本发明提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下：

（a）按下列比例配制好试剂：

甘氨酸缓冲液                80mmol/L

显色剂                      10mmol/L

嘌呤核苷磷酸化酶           0.5-1KU/L

黄嘌呤氧化酶               0.8-1KU/L

过氧化物酶                  0.6-1KU/L

5’-次黄嘌呤核苷酸         30mmol/L

4-氨基安替比林溶液         10mmol/L

（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；

（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；

（d）根据吸光度变化值计算出样本中5’-核糖核苷酸水解酶的浓度。

本发明试剂盒的独特性在于，显色剂为含有3-甲基-N，N-二丙磺酸钠苯胺的磷酸盐缓冲液，4-氨基安替比林溶液为含有4-氨基安替比林的氯仿溶液。经过一系列反应后，可形成醌类化合物，具有显色效果好、反应迅速、稳定的有点。

具体实施方式

下述实施例是为了更详细的解释本发明，但不应理解为本发明局限于此。

实施例1：

本发明的试剂盒举例可以是双试剂，其中：

试剂1：

甘氨酸缓冲液                80mmol/L

显色剂                       10mmol/L

嘌呤核苷磷酸化酶             0.5KU/L

黄嘌呤氧化酶                 0.8KU/L

过氧化物酶                   0.6KU/L

试剂2：

5’-次黄嘌呤核苷酸           30mmol/L

4-氨基安替比林溶液           10mmol/L

其中：

（1）甘氨酸缓冲液为35mM甘氨酸，0.05%吐温-20, 10mM乙二胺四乙酸二钠，0.05%硫柳汞，0.4M NaCl，pH6.5-10；

（2）显色剂为含有20mM 3-甲基-N，N-二丙磺酸钠苯胺的磷酸盐缓冲液；

（3）4-氨基安替比林溶液为含有25mM 4-氨基安替比林的氯仿溶液。

实施例2：试剂盒使用方法

1.试剂准备，试剂可为液体双试剂，开瓶即用，其中：

试剂1：

甘氨酸缓冲液                80mmol/L

显色剂                      10mmol/L

嘌呤核苷磷酸化酶             0.5KU/L

黄嘌呤氧化酶                 0.8KU/L