[发明专利]一种5'-核糖核苷酸水解酶检测试剂盒及其制备方法有效
| 申请号: | 201210261802.9 | 申请日: | 2012-07-27 |
| 公开(公告)号: | CN102747134A | 公开(公告)日: | 2012-10-24 |
| 发明(设计)人: | 张雷 | 申请(专利权)人: | 北京恩济和生物科技有限公司 |
| 主分类号: | C12Q1/44 | 分类号: | C12Q1/44;C12Q1/34;C12Q1/28;C12Q1/26 |
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| 地址: | 100083 北京市*** | 国省代码: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 核糖 核苷酸 水解 检测 试剂盒 及其 制备 方法 | ||
1.一种5’-核糖核苷酸水解酶检测试剂盒,其组成为:
甘氨酸缓冲液、显色剂、嘌呤核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶、5’-次黄嘌呤核苷酸、4-氨基安替比林溶液。
2.权利要求1的试剂盒,其特征在于:
甘氨酸缓冲液为15-45mM甘氨酸,0.05%吐温-20, 10mM乙二胺四乙酸二钠,0.05%硫柳汞,0.4M NaCl,pH6.5-10;
显色剂为含有20mM 3-甲基-N,N-二丙磺酸钠苯胺的磷酸盐缓冲液;
4-氨基安替比林溶液为含有20-30mM 4-氨基安替比林的氯仿溶液。
3.上述试剂盒的制备和操作方法,主要步骤为:
(a)按下列比例配制好试剂:
甘氨酸缓冲液 80mmol/L
显色剂 10mmol/L
嘌呤核苷磷酸化酶 0.5-1KU/L
黄嘌呤氧化酶 0.8-1KU/L
过氧化物酶 0.6-1KU/L
5’-次黄嘌呤核苷酸 30mmol/L
4-氨基安替比林溶液 10mmol/L
(b)将试剂与待测样本按一定比例混合,使其完全反应;
(c)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值;
(d)根据吸光度变化值计算出样本中5’-核糖核苷酸水解酶的浓度。
4.权利要求3的方法,其特征在于,被测样品与试剂比例应控制在1:45到1:60之间。
5.权利要求3的方法,其特征在于,反应温度为37(±1)℃。
6.权利要求3的方法,其特征在于,反应时间为10-15分钟。
7.权利要求3的方法,其特征在于,用半/全自动生化分析仪检测的主波长为550nm,副波长为700 nm。
8.权利要求3的方法,其特征在于,试剂可配置成单试剂、双试剂或三试剂。
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