[发明专利]肌酸磷酸激酶同工酶化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体的涉及肌酸磷酸激酶同工酶（CK-MB）化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

肌酸磷酸激酶(Creatine Kinase,CK)是由脑型亚单位（B）和肌型亚单位（M）组成的二聚体，有CK-MM、CK-MB和CK-BB三种同工酶，CK大量存在于心肌、骨骼肌和脑等组织，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶，其中CK-BB主要存在于大脑、前列腺、肠、肺；骨骼肌中存在大量的CK-MM和少量的CK-MB；而心肌组织虽以CK-MM为主，但CK-MB所占比例远较其他组织高。

目前，心肌损伤、心肌梗塞和急性心肌梗死（AMI）已经成为威胁人类生命的主要疾病之一，心肌是唯一含CK-MB较多的器官，CK-MB是心肌类疾病早期诊断的重要指标。正常人血清中CK-MM占94%～96%，CK-MB仅占5%以下，若血清中CK-MB明显增高，说明心肌受累，一般认为当血清中CK-MB大于总活性的6%以上为心肌损伤的特异性指标。另外，CK-MB诊断透壁型心肌梗死的敏感性和特异性均极高，在起病4h后CK-MB含量增高，在16～24小时后达高峰，3～4天恢复正常。若CK-MB在急性心肌梗死（AMI）后仍保持在高水平，则意味着心肌坏死还继续进行；若恢复正常后再次升高，提示原梗死部位扩展或有新的梗死出现，由于半衰期短，CK-MB和亚型在监测再发损伤中比肌钙蛋白更为敏感；其增高的程度能较准确地反映梗死的范围；其高峰出现时间是否提前有助于判断溶栓治疗是否成功。单独进行检测，CK-MB是很理想的标志物；与心肌肌钙蛋白进行联合检测，更有助于提高AMI的诊断阳性率。

目前，临床领域应用的CK-MB检测方法主要有电泳、放射性免疫法、免疫抑制法、酶联免疫测定法和化学发光免疫测定法等。电泳法和免疫抑制法均会受到溶血和巨CK的干扰，此外，免疫抑制法还受CK-BB的干扰，使这两种检测方法的应用受到了限制；酶联免疫测定法由于存在敏感性相对较低，所用标记酶与底物可定量测定范围窄、仪器测定范围窄等缺点，限制了其在微量免疫定量测定中的应用；放射性免疫由于存在试剂有效期短、操作繁琐、放射性污染等缺点，使其应用受到了限制。

化学发光免疫技术的研究起步于80年代初，快速发展应用于90年代，为当今最为敏感的微量免疫测定法。主要特点是高敏感性、可测定浓度范围宽、样本无需稀释即可检测、试剂有效期长、操作简单、检测自动化成度高、数据自动生成处理能力强、测定仪器兼容性好、无环境污染等，因而得到了迅速发展与应用。但目前使用化学发光方法检测CK-MB还没有广泛应用在临床上，也未见相关文献的报道。

发明内容

本发明要解决的问题是提供血肌酸磷酸激酶(Creatine Kinase,CK)的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，解决了灵敏度低，检测范围窄的缺陷。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：肌酸磷酸激酶同工酶化学发光免疫定量检测试剂盒，所述试剂盒包括：CK-MB抗体包被板、CK-MB抗体酶结合物、CK-MB校准品、CK-MB质控品、20倍浓缩洗液、发光液A液和B液。

所述的肌酸磷酸激酶同工酶抗体包被板为包被有CK-MB抗体的96孔或48孔白色微孔板，孔间平均变异不高于10%。

所述的抗体酶结合物所用的酶为辣根过氧化物酶，纯度要求RZ≥3.0，活性≥250U/mL，购自Sigma公司。

所述的CK-MB抗体购自Fitzgerald公司，浓度与标示浓度相差≤10%，效价不低于10⁵倍稀释。

所述的CK-MB质控品包括低值质控品（QcL）和高值质控品（QcH），其中低值质控品的浓度范围是8～12ng/mL，高值质控品的浓度范围是120～180ng/mL。

所述的肌酸磷酸激酶同工酶化学发光免疫定量检测试剂盒，所述的发光液A液包含0.7g/L鲁米诺，0.165g/L对碘酚；B液是浓度为0.675g/L过氧化脲的水溶液。

所述的20倍浓缩洗液包括75.5g/LTris，120g/LNaCl，5mL/L Tween-20，1g/L Proclin300。

上述试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

1）CK-MB抗体包被板制备