[发明专利]肌酸磷酸激酶同工酶化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.肌酸磷酸激酶同工酶化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：CK-MB抗体包被板、CK-MB抗体酶结合物、CK-MB校准品、CK-MB质控品、20倍浓缩洗液、发光液A液和B液。

2.根据权利要求1所述的肌酸磷酸激酶同工酶化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的肌酸磷酸激酶同工酶抗体包被板为包被有CK-MB抗体的96孔或48孔的白色微孔板，白色微孔板的孔间平均变异不高于10%。

3.根据权利要求1所述的肌酸磷酸激酶同工酶化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的抗体酶结合物所用的酶为辣根过氧化物酶，纯度要求RZ≥3.0，活性≥250U/mL。

4.根据权利要求1所述的肌酸磷酸激酶同工酶化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的CK-MB抗体购自Fitzgerald公司，浓度与标示浓度相差≤10%，效价不低于10⁵倍稀释。

5.根据权利要求1所述的醛固酮化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于CK-MB质控品包括低值质控品和高值质控品，其中低值质控品的浓度范围是8～12ng/mL，高值质控品的浓度范围是120～180ng/mL。

6.根据权利要求1所述的肌酸磷酸激酶同工酶化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的发光液A液包含0.7g/L鲁米诺，0.165g/L对碘酚；B液包含0.675g/L过氧化脲。

7.根据权利要求1所述的肌酸磷酸激酶同工酶化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的20倍浓缩洗液包括75.5g/LTris，120g/LNaCl，5mL/LTween-20，1g/LProclin300。

8.一种制备所述权利要求1的试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）CK-MB抗体包被板的制备

将CK-MB抗体用0.05mol/LpH9.6碳酸盐缓冲液稀释至1～10ug/mL，加入到白色微孔板中，37℃包被2小时；弃去孔内液体，用pH7.4PBS-T缓冲液洗板，然后加入含有0.5%BSA的磷酸盐缓冲液封闭微孔板，37℃封闭2小时；弃去孔内液体，甩干后37℃烘干4小时；装入铝箔袋，加入干燥剂，封口，贴标签，储存于2~8℃；

2）采用高碘酸钠氧化法将辣根过氧化物酶和CK-MB抗体连接在一起，得CK-MB抗体酶结合物，并加入酶结合物稳定剂，于-20℃下储存；

3）CK-MB校准品

将高纯度的CK-MB用校准品稀释液稀释成浓度分别为0,5,25,100,250,500ng/mL的校准品；

4）CK-MB质控品的配制：在正常人血清中加入适量的CK-MB纯品，配制低值质控品和高值质控品，其浓度的平均值分别为10ng/mL和150ng/mL；

5）配制发光液A液和B液

A液是含有0.7g/L鲁米诺和0.165g/L对碘酚的pH8.6的5mmol/LTris·HCl缓冲液为；B液是浓度为0.675g/L的过氧化脲水溶液，用工艺用水配制；

6）配制20倍浓缩洗液

20倍浓缩洗液的配方如下：75.5g/LTris，120g/LNaCl，5mL/LTween-20，1g/LProclin300；

7）组装

将上述试剂组装成盒，储存于2～8℃；

8）对采用该方法制的的试剂盒的进行物理检查，准确度、剂量-反应曲线的线性、精密度、特异性、灵敏度、质控品测定值和稳定性进行测定。

9.根据权利要求8所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述的包被板为包被有CK-MB抗体的96孔或48孔白色微孔板。