[发明专利]检测艾滋病相关支原体的引物、探针组合及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及用于检测艾滋病相关支原体的荧光定量PCR引物和探针及试剂盒。艾滋病相关支原体分别为穿透支原体（Mycoplasma penetrans）、发酵支原体（Mycoplasma fermentans）和梨支原体（Mycoplasma pirum）。

背景技术

艾滋病相关支原体通常指穿透支原体（Mycoplasma penetrans）、发酵支原体（Mycoplasma fermentans）和梨支原体（Mycoplasma pirum）。这三种支原体在HIV感染及AIDS的发展过程中起着辅助因子或者促进因子的作用，与艾滋病的发病具有显著的相关性，因此称为艾滋病相关支原体（参考文献：Montagnier L,Blanchard A.Mycoplasmas as co-factors in infection due to the human immunodeficiency virus[J].Clin infect Dis,1993,17:5309.）。如果诊断出艾滋病患者带有穿透支原体、发酵支原体和梨支原体，在现有的治疗方案上进行针对性治疗，就能够减少感染机会，也就可以在一定程度上延长患者的生命。

目前国内临床对于上述3种支原体的诊断技术十分有限，造成部分携带艾滋病相关支原体的患者不能及时有效诊断和治疗，加重了艾滋病病毒对机体免疫抑制，增大了机会感染其他病原，严重威胁艾滋病患者生命。及时有效诊断艾滋病感染者是否感染上述3种艾滋病相关支原体对于艾滋病的辅助治疗十分有效，但常规的病原体分离培养方法较难实施。这是因为艾滋病相关支原体的生长速度缓慢，分离培养困难，既增加了诊断成本，又延误了确诊时机，因此临床上不使用分离培养作为检测手段。目前，国内外尚无成熟的艾滋病相关支原体血清学检测试剂盒。

尽管临床对艾滋病相关支原体在艾滋病发展进程中的作用及其临床检测技术越来越重视，但是目前已报道的PCR检测技术主要为普通PCR技术。国内对于艾滋病相关支原体检测主要依靠PCR方法（参考文献：糜祖煌,赵季文,秦玲.淋病患者AIDS相关支原体的分离培养与核酸检测[J].中国人兽共患病杂志，2003，19(3):79-81.贾成梅,施素洁,羊海涛,等.从艾滋病患者和HIV感染者中分离2株支原体[J].中国人兽共患病杂志,2003,19(6):77-79.）。PCR检测灵敏度一般，且对于3种支原体分别进行检测和电泳判读结果耗时费力，极大的增加了临床检测工作量和检测成本，降低了检测效率。因此，急需建立一种快速、灵敏、特异的检测技术来提高临床对艾滋病相关支原体的检测能力。

发明内容

本发明的目的在于一种能同时检测3种检测艾滋病相关支原体的试剂盒和诊断试剂，以克服上述不足。

本发明首先提供一种用于同时检测艾滋病相关支原体的三重荧光PCR引物组合，所述艾滋病相关支原体分别为穿透支原体（Mycoplasma penetrans）、发酵支原体（Mycoplasma fermentans）和梨支原体（Mycoplasma pirum）。

本发明通过对NCBI数据库中报道的穿透支原体的ftsZ基因、发酵支原体的ftsZ基因和梨支原体的rpoB基因中保守区域使用Beacon Desinger7软件设计探针和引物。探针类型均为TaqMan探针，其中穿透支原体探针5’标记荧光基团FAM，3’标记淬灭基团BHQ1；发酵支原体探针5’标记荧光基团HEX，3’标记淬灭基团BHQ1；梨支原体探针5’标记荧光基团ROX，3’标记淬灭基团BHQ2。

进一步地，本发明提供的引物组合中，检测穿透支原体的引物序列为：

Mpen-F:ACGTGAGTTAACCATGTA（SEQ ID NO.1）

Mpen-R:GGTTCGTCTTCTATCTAATAG（SEQ ID NO.2）；

检测发酵支原体的引物序列为：

Mfer-F:TGCTGTTTCAATGTCATC（SEQ ID NO.3）

Mfer-R:AGACCGAGCTATTAAAGC（SEQ ID NO.4）；

检测梨支原体的引物序列为：

Mpi-F:CGTGATTTCTTTAATACTCATC（SEQ ID NO.5）

Mpi-R:CACGAATATCCAAGTTAGG（SEQ ID NO.6）。