[发明专利]检测艾滋病相关支原体的引物、探针组合及试剂盒

权利要求书

1.一种用于同时检测艾滋病相关支原体的三重荧光PCR引物组合，所述艾滋病相关支原体为穿透支原体（Mycoplasma penetrans）、发酵支原体（Mycoplasma fermentans）和梨支原体（Mycoplasma pirum）。

2.如权利要求1所述的引物组合，其中检测穿透支原体的引物序列为：

Mpen-F:ACGTGAGTTAACCATGTA

Mpen-R:GGTTCGTCTTCTATCTAATAG；

检测发酵支原体的引物序列为：

Mfer-F:TGCTGTTTCAATGTCATC

Mfer-R:AGACCGAGCTATTAAAGC；

检测梨支原体的引物序列为：

Mpi-F:CGTGATTTCTTTAATACTCATC

Mpi-R:CACGAATATCCAAGTTAGG。

3.与权利要求2所述引物组合配合使用的荧光探针组合，其特征在于，与穿透支原体的引物配合使用的探针核苷酸序列为：

Mpen-P:FAM-TTACCAGCACCACCAATACCAATAAT-BHQ1

与发酵支原体的引物配合使用的探针核苷酸序列为：

Mfer-P:HEX-TTGATGATGCTTTAATGACTCCACTTT-BHQ1

与穿透支原体的引物配合使用的探针核苷酸序列为：

Mpi-P:ROX-CCAGGTCCCATTGCTGAAATTCT-BHQ2。

4.权利要求2所述的引物组合和权利要求3所述的荧光探针组合在制备艾滋病相关支原体的检测试剂盒或诊断试剂中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，将Platium quantitative PCR super Mix UDG12.5μl，50mM MgCl₂2.0μl；Platium Taq0.25μl；dNTP混合溶液1.0μl；Mfer-F和Mfer-R各0.8μl；Mfer-P0.4μl；Mpen-F和Mpen-R各0.5μl；Mpen-P0.2μl；Mpi-F和Mpi-F各0.3μl；Mpi-P0.1μl，无核酸酶水0.35μl；待测样品DNA模板5.0μl构成25μl的检测反应体系；上述引物和探针浓度均为25μM。

6.如权利要求4或5所述的应用，其特征在于，试剂盒工作条件为95℃3min，1个循环；95℃15s，57℃-60℃15s，40个循环；然后终止反应。

7.一种艾滋病相关支原体的诊断试剂，其特征在于，含有权利要求2所述的引物组合和权利要求3所述的荧光探针组合；所述艾滋病相关支原体为穿透支原体（Mycoplasma penetrans）、发酵支原体（Mycoplasma fermentans）和梨支原体（Mycoplasma pirum）。

8.一种艾滋病相关支原体的检测试剂盒，其特征在于，含有权利要求2所述的引物组合和权利要求3所述的荧光探针组合；所述艾滋病相关支原体为穿透支原体（Mycoplasma penetrans）、发酵支原体（Mycoplasma fermentans）和梨支原体（Mycoplasma pirum）。

9.如权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，其25μl的检测反应体系的具体配置为：Platium quantitative PCR super Mix UDG12.5μl，50mM MgCl₂2.0μl；Platium Taq0.25μl；dNTP混合溶液1.0μl；Mfer-F和Mfer-R各0.8μl；Mfer-P0.4μl；Mpen-F和Mpen-R各0.5μl；Mpen-P0.2μl；Mpi-F和Mpi-F各0.3μl；Mpi-P0.1μl，无核酸水0.35μl；待测样品DNA模板5.0μl；上述引物和探针浓度均为25μM。

10.如权利要求8或9所述的检测试剂盒，其特征在于，其工作条件为95℃3min，1个循环；95℃15s，57℃-60℃15s，40个循环。