[发明专利]金核霉素的生物合成基因簇及其应用

权利要求书

1.一种金核霉素生物合成基因的集合，其特征在于，所述基因集合由编码AnmB蛋白的基因、编码AnmC蛋白的基因、编码AnmD蛋白的基因、和编码AnmE蛋白的基因构成。

2.如权利要求1所述的基因的集合，其特征在于，

所述的AnmB蛋白包括选自下组的多肽：

(a)氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的多肽；或

(b)包含(a)所限定的序列经过一个或多个(较佳地1-10个，更佳地1-5个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，且基本具有(a)所限定的多肽功能的由(a)衍生的多肽；

所述的AnmC蛋白包括选自下组的多肽：

(a)氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的多肽；或

(b)包含(a)所限定的序列经过一个或多个(较佳地1-10个，更佳地1-5个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，且基本具有(a)所限定的多肽功能的由(a)衍生的多肽；

所述的AnmD蛋白包括选自下组的多肽：

(a)氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的多肽；或

(b)包含(a)所限定的序列经过一个或多个(较佳地1-10个，更佳地1-5个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，且基本具有(a)所限定的多肽功能的由(a)衍生的多肽；和

所述的AnmE蛋白包括选自下组的多肽：

(a)氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的多肽；或

(b)包含(a)所限定的序列经过一个或多个(较佳地1-10个，更佳地1-5个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列，且基本具有(a)所限定的多肽功能的由(a)衍生的多肽。

3.一种金核霉素生物合成基因簇，其特征在于，所述基因簇包括金核霉素生物合成涉及的4个基因，所述基因簇核苷酸序列如SEQ ID NO:1的第5294-10434位碱基所示，具体为：

1)基因anmB，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1的第5294-6964位碱基所示，编码的蛋白为腺苷高半胱氨酸水解酶，长度为556个氨基酸；

2)基因anmC，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1的第6957-8057位碱基所示，编码的蛋白为脱氢酶，长度为366个氨基酸；

3)基因anmD，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1的第8054-9172位碱基所示，编码的蛋白为氧化还原酶，长度为372个氨基酸；和

4)基因anmE，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1的第9169-10434位碱基所示，编码的蛋白为radical SAM相关蛋白，长度为421个氨基酸。

4.如权利要求3所述的金核霉素生物合成基因簇所编码的编码蛋白。

5.如权利要求4所述的编码蛋白，其特征在于，所述的编码蛋白为AnmB蛋白、AnmC蛋白、AnmD蛋白和AnmE蛋白，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:3-6所示。

6.如权利要求1或2所述的金核霉素生物合成基因的集合，或权利要求3所述的金核霉素生物合成基因簇，或权利要求4或5所述的编码蛋白的用途，其特征在于，用于合成抗生素金核霉素、金核霉素的药学上可接受的盐及类似物。

7.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求1或2所述的金核霉素生物合成基因的集合，或含有权利要求3所述的金核霉素生物合成基因簇。

8.一种重组的宿主细胞，其特征在于，含有权利要求7所述的载体或染色体上整合有单拷贝或多拷贝的外源的权利要求1或2所述的金核霉素生物合成基因的集合，或单拷贝或多拷贝的权利要求3所述的金核霉素生物合成基因簇。

9.一种产生金核霉素的方法，其特征在于，包括步骤：培养权利要求8所述的宿主细胞，从而表达金核霉素；以及从培养体系中分离金核霉素。

10.一种金色链霉菌，其特征在于，所述金色链霉菌是金色链霉菌苏州变种(CGMCC No.0122)的突变株，所述突变株中金核霉素生物合成基因簇中的一个或多个基因失活，从而不产生金核霉素。