[发明专利]一种产胞外多糖的菠萝泛菌及其多糖的提取和应用

说明书

技术领域

本发明属于产胞外多糖的微生物技术领域，涉及一种产胞外多糖的菠萝泛菌及其多糖的提取和应用。 

背景技术

多糖的抗氧化作用已经成为最为活跃的研究课题之一。通常植物和藻类来源的多糖较为普遍，但近些年来，微生物来源的多糖（胞外多糖）引起广泛关注，尤其是细菌和真菌来源的胞外多糖，因其易于分离纯化而且产量高等优点在工业生产中颇受青睐。 

胞外多糖(Exopolysaccharide，EPS)是细菌细胞外含糖结构的总称，包括革兰氏阴性细菌胞膜外的多糖成分和革兰氏阳性菌得肽聚糖，是细菌在特定环境调节下产生的高分子物质。作为细菌的次生代谢产物，胞外多糖对细菌的作用主要有：使细菌群集抵抗吞噬；保护细菌不和抗体结合；形成群集内细菌交替性生长；帮助细菌群体向周围获得足够营养。作为与人类生活紧密相关的一类生物高分子，近年的研究发现细菌胞外多糖还具有抗氧化、抗辐射、免疫调节、降血糖、降血脂，以及抗肿瘤、抗肝炎病毒等特殊的生物学活性。 

近年来，微生物多糖抗氧化活性的研究报道很多，其在体外可以清除自由基，还具有抗脂质过氧化的能力；在体内则可以提高抗氧化酶的活性，也表现出抗脂质过氧化的能力。与其他外源性抗氧化剂相比，抗氧化多糖具有低毒、安全来源广等特点。作为外源性抗氧化剂，多糖在生物体内发挥作用更为复杂，它可直接参与淬灭自由基的途径外，还可能与通过调节机体内内源性抗氧化剂的活性相关。另外多糖可以作为一种天然的生物抗氧化剂进行复配，增强对人体健康的保护作用。 

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种产胞外多糖的菠萝泛菌及其多糖的提取和应用，该菠萝泛菌是一种新的微生物，其分泌的胞外多糖具有抗氧化活性。 

本发明是通过以下技术方案来实现： 

一种产胞外多糖的菠萝泛菌，其分类命名为Pantoea ananatis G-14，保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号为CCTCC M2010107。 

所述的产胞外多糖的菠萝泛菌在生长过程中向胞外分泌多糖。 

所述的多糖具有抗氧化活性。 

基于Pantoea ananatis G-14发酵培养提取胞外多糖的方法，包括以下步骤： 

1）将P.ananatis G-14单菌落接种在LB液体培养基中，于25～30℃下，搅拌，通气培养8～10h；然后转接至发酵培养基中，于25～30℃下，搅拌，通气培养48～65h； 

所述的发酵培养基是在LB液体培养基中添加质量分数1～5%的单糖或双糖作为附加碳源； 

2）培养完成后，离心，收集培养液上清； 

3）将培养液上清浓缩后，加入其体积2～5倍的体积分数80～95%的乙醇溶液，充分混匀，0～10℃下静置12～24h后，收集静置后的沉淀，得到粗多糖； 

4）分离去除粗多糖中的蛋白后，在截留分子量为8000～14000的透析袋中以灭菌纯水缓冲液透析24h以上，每12小时更换1次缓冲液； 

将透析袋中的多糖溶液低温冷冻干燥获得胞外多糖干粉。 

所述的步骤1）是将P.ananatis G-14单菌落接种在LB液体培养基中，于25～30℃下，100～300rpm搅拌，通气培养8～10h；然后以1～5%的接种量转接至发酵培养基中，于25～30℃下，搅拌，通气培养48～65h； 

所述的发酵培养基是在LB液体培养基中添加质量分数1～5%的葡萄糖 作为附加碳源。 

所述的步骤2）的离心为8000～12000rpm，3～10min，4℃离心收集培养液上清。 

所述的步骤3）为：将培养液上清减压浓缩至原体积的1/5～1/10，然后加入其体积2～5倍的体积分数80～95%、4℃预冷的乙醇溶液，充分混匀，0～4℃下放置12～24h后使胞外多糖充分沉淀； 

8000～12000rpm，3～10min，4℃离心收集沉淀，得到粗多糖。 

所述的步骤4）为：粗多糖采用Sevage法除蛋白后，离心取上清，在截留分子量为8000～14000的透析袋中在灭菌纯水中透析48小时，每12小时更换1次缓冲液； 

将透析袋中的多糖溶液在使用冷冻干燥机中冷冻干燥，冷凝温度<-50℃，真空度<20Pa，冷冻时间为18～24h，获得胞外多糖干粉。 

Pantoea ananatis G-14发酵培养分泌的胞外多糖在制备抗氧化剂的应用。 

所述的抗氧化剂为：