[发明专利]一种产胞外多糖的菠萝泛菌及其多糖的提取和应用

权利要求书

1.一种产胞外多糖的菠萝泛菌，其特征在于，其分类命名为Pantoea ananatis G-14，保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号为CCTCCM2010107。

2.如权利要求1所述的产胞外多糖的菠萝泛菌，其特征在于，其在生长过程中向胞外分泌多糖。

3.基于Pantoea ananatis G-14发酵培养提取胞外多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将P.ananatis G-14单菌落接种在LB液体培养基中，于25～30℃下，搅拌，通气培养8～10h；然后转接至发酵培养基中，于25～30℃下，搅拌，通气培养48～65h；

所述的发酵培养基是在LB液体培养基中添加质量分数1～5%的单糖或双糖作为附加碳源；

2）培养完成后，离心，收集培养液上清；

3）将培养液上清浓缩后，加入其体积2～5倍的体积分数80～95%的乙醇溶液，充分混匀，0～10℃下静置12～24h后，收集静置后的沉淀，得到粗多糖；

4）分离去除粗多糖中的蛋白后，在截留分子量为8000～14000的透析袋中以灭菌纯水缓冲液透析24h以上，每12小时更换1次缓冲液；

将透析袋中的多糖溶液低温冷冻干燥获得胞外多糖干粉。

4.如权利要求3所述的基于Pantoea ananatis G-14发酵培养提取胞外多糖的方法，其特征在于，所述的步骤1）是将P.ananatis G-14单菌落接种在LB液体培养基中，于25～30℃下，100～300rpm搅拌，通气培养8～10h；然后以1～5%的接种量转接至发酵培养基中，于25～30℃下，搅拌，通气培养48～65h；

所述的发酵培养基是在LB液体培养基中添加质量分数1～5%的葡萄糖作为附加碳源。

5.如权利要求3所述的基于Pantoea ananatis G-14发酵培养提取胞外多糖的方法，其特征在于，所述的步骤2）的离心为8000～12000rpm，3～10min，4℃离心收集培养液上清。

6.如权利要求3所述的基于Pantoea ananatis G-14发酵培养提取胞外多糖的方法，其特征在于，所述的步骤3）为：将培养液上清减压浓缩至原体积的1/5～1/10，然后加入其体积2～5倍的体积分数80～95%、4℃预冷的乙醇溶液，充分混匀，0～4℃下放置12～24h后使胞外多糖充分沉淀；

8000～12000rpm，3～10min，4℃离心收集沉淀，得到粗多糖。

7.如权利要求3所述的基于Pantoea ananatis G-14发酵培养提取胞外多糖的方法，其特征在于，所述的步骤4）为：粗多糖采用Sevage法除蛋白后，离心取上清，在截留分子量为8000～14000的透析袋中在灭菌纯水中透析48小时，每12小时更换1次缓冲液；

将透析袋中的多糖溶液在使用冷冻干燥机中冷冻干燥，冷凝温度<-50℃，真空度<20Pa，冷冻时间为18～24h，获得胞外多糖干粉。

8.Pantoea ananatis G-14发酵培养分泌的胞外多糖在制备抗氧化剂的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的抗氧化剂为：

清除羟自由基的抗氧化剂、清除超氧阴离子自由基的抗氧化剂、脂质过氧化抑制剂、清除DPPH自由基的抗氧化剂中的一种或几种。

10.Pantoea ananatis G-14发酵培养分泌的胞外多糖在制备促进肠道损失修复、促进肠道益生菌繁殖和/或抑制肠道病原菌繁殖的药物的制备。