[发明专利]前列腺特异抗原均相发光免疫分析检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种前列腺特异抗原均相发光免疫分析检测试剂盒，主要包括均相发光96孔测定板，前列腺特异抗原标准品，链霉亲和素标记供体微球溶液，其特征在于：该试剂盒还包括有生物素标记抗前列腺特异抗原抗体和抗前列腺特异抗原抗体包被受体微球溶液。

2.根据权利要求1所述前列腺特异抗原均相发光免疫分析检测试剂盒，其特征在于：

抗前列腺特异抗原抗体包被受体微球溶液是按以下配比的原料制备的，

a.将欲标记的抗前列腺特异抗原抗体置于0.1M pH 8.0 磷酸盐缓冲液透析，调整浓度至1-2毫克/毫升备用；

b.受体微球加入到0.1M pH 8.0 磷酸盐缓冲盐水溶液中，离心16000转/分洗涤微球，弃上清，用上述溶液将微球浓度调整至10-20毫克/毫升；

c.按受体微球:透析后抗前列腺特异抗原抗体为1:10的质量比混合，于0.1M pH 8.0 磷酸盐缓冲盐水溶液中，依次加入体积百分比为0.6-0.625% 的10%吐温20溶液、4-5% 新鲜配制的400 mM 氰基硼氢化钠溶液，充分混匀， 37℃ 反应48小时以上；

d.用800mM氢氧化钠溶液配制溶度为65毫克/毫升的羧甲氨基胺溶液，加体积百分比为4-5%的羧甲氨基胺溶液于标记后的离心管内，37℃封闭反应1小时；

e. 吸取上清溶液，再加入pH 8.0的100mM Tris-HCl溶液，重新悬浮微球、离心洗球，最终调整浓度至5-10微克/毫升备用。

3.根据权利要求1所述前列腺特异抗原均相发光免疫分析检测试剂盒，其特征在于：生物素标记抗前列腺特异抗原抗体是按以下配比的原料制备的，

a.将纯化的抗前列腺特异抗原抗体调整为5.0毫克/毫升，用0.1M，pH9.5的碳酸盐缓冲液透析，过夜并于A_280nm计算抗体总量为5.35毫克；

b.将活化的生物素溶于二甲基甲酰胺中，按照生物素与纯化的抗前列腺特异抗原抗体的摩尔比为20:1的比例将二者混合，反应1小时；

c.将反应后的液体用0.01M 磷酸盐缓冲盐水于4℃透析24小时，即制成生物素标记抗前列腺特异抗原抗体。

4.一种前列腺特异抗原均相发光免疫分析检测方法，其是按以下步骤进行的，

a.将分别瓶装的生物素标记抗前列腺特异抗原抗体、前列腺特异抗原标准品、抗前列腺特异抗原抗体包被受体微球溶液、链霉亲和素标记供体微球溶液取出，至室温平衡20分钟；均相发光96孔测定板根据需要做好标记；

b.测定板微孔内依次加入25微升待测样本、25微升生物素标记抗前列腺特异抗原抗体、25微升抗前列腺特异抗原抗体包被受体微球溶液，混匀后置37℃温箱或水浴，温育30分钟；

c.各孔再加入100微升链霉亲和素标记供体微球溶液，混匀后置37℃温箱或水浴，继续温育15分钟；

d. 应用均相发光免疫分析仪测定各孔发光强度，激发波长采用680纳米，检测波长采用615纳米；

e.标准品测定结果，采用四参数拟合方式绘制标准曲线或获得数学函数，通过标准曲线或数学函数计算待测样品前列腺特异抗原浓度。