[发明专利]一种同时检测鸡蛋中阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨苄西林残留的方法

说明书

技术领域

本发明属于兽药残留检测领域，具体涉及一种同时检测鸡蛋中阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨苄西林残留的方法。

背景技术

目前国内外对阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨苄西林的残留检测方法虽然有不少报道，主要有HPLC/UV法、HPLC/FLD法和HPLC-MS/MS法。HPLC/UV法样品杂质峰较多，干扰较大，对样品的净化要求较高，而且紫外检测器的灵敏度较低。HPLC/FLD法灵敏度高，样品杂质峰较少，对样品的净化要求较低，但阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨苄西林本身无荧光吸收，样品需进行衍生化处理，且衍生化后四种药物色谱峰无法有效分离。但到目前为止，国内外同时检测鸡蛋中阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨苄西林残留的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法的研究国内外尚未见报道。申请号为2011101751979的中国专利申请公开了一种用HPLC/FLD法同时检测鸡蛋中阿莫西林和氨苄西林的方法，但是该方法不能同时检测并确证阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨苄西林在鸡蛋中的残留，并满足欧盟标准。

发明内容

为了能同时检测并确证阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨苄西林在鸡蛋中的残留，满足欧盟标准，本发明提供了一种高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS），能同时检测鸡蛋中阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨苄西林的残留。

本发明所采用的技术方案是：一种同时检测鸡蛋中阿莫西林、阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林和氨苄西林残留的方法，是将鸡蛋样品经过提取、净化后，以乙腈-0.1%甲酸为流动相,采用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）检测。

液相色谱条件：色谱柱：Agilent C₁₈，5μm，150mm×4.6mm i.d.；保护柱：C₁₈柱，5μm；流动相：乙腈-0.1%甲酸，分离AMO、AMA、DIKETO和AMP的梯度洗脱程序见表1；流速：1.0mL·min^-1；柱温：25℃；进样体积：20μL。

表1分离AMO、AMA、DIKETO和AMP的梯度洗脱程序

质谱条件为：离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；电喷雾毛细管电压：4000V；干燥气温度：300℃；干燥气流速：10L·min^-1；雾化器气体压力：15psi；鞘气温度：250℃；鞘气流速：7L·min^-1；二级碰撞气：氮气。AMO、AMA、DIKETO、AMP和PV的保留时间和优化质谱条件见表2。

表2AMO，AMA，DIKETO，AMP和PV的保留时间和优化质谱条件

注:*定量离子

本发明中鸡蛋样品中阿莫西林和氨苄西林的提取、萃取和净化推荐使用乙腈提取，用二氯甲烷萃取净化。具体操作是：将鸡蛋制成匀浆后，加入PV（青霉素V）内标溶液，然后加入乙腈溶液中混匀，离心，将上清液移出，加入1mL乙酸铵溶液（pH6.7），置漩涡混合器上混匀，再用经超纯水饱和的二氯甲烷萃取，离心，将上层水相转移至玻璃离心管中，最后用氮吹仪吹干。上机前残渣用1.0mL2%乙腈分两次漩涡振荡溶解，转移至1.5mL离心管中；12100×g离心15min，上清液经0.22μm滤膜过滤，滤液供HPLC-MS/MS测定。

本发明采用HPLC-MS/MS法、与HPLC/FLD法相比，能进行确证分析，能同时检测鸡蛋中的阿莫西林及其代谢产物（阿莫西林酸、二酮哌嗪阿莫西林）和氨苄西林，灵敏度高。

附图说明

图1鸡蛋中AMO的基质添加标准曲线。

图2鸡蛋中AMA的基质添加标准曲线。

图3鸡蛋中DIKETO的基质添加标准曲线。

图4鸡蛋中AMP的基质添加标准曲线。

图5是空白鸡蛋样品离子色谱图。

图6是基质添加标准品离子色谱图。

图7是添加鸡蛋样品离子色谱图。

图8AMO的子离子扫描图。

图9AMA的子离子扫描图。

图10DIKETO的子离子扫描图。

图11AMP的子离子扫描图。

图12PV的子离子扫描图。

具体实施方式

在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。