[发明专利]拉米夫定的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及合成拉米夫定（即(2R,5S)-4-氨基-1-(2-羟甲基-1,3-氧硫杂环戊-5-基)-1H-嘧啶-2-酮）的方法，更具体地说，涉及拉米夫定酸杂质含量低的拉米夫定的制备方法。该方法通过对拉米夫定合成工艺和原料质量的控制，制备出符合英国药典要求的高质量的拉米夫定产品。 

背景技术

拉米夫定(lamivudine)的结构式为： 

化学名为(2R，5S)-4-氨基-1-(2-羟甲基-1,3-氧硫杂环戊-5-基)-1H-嘧啶-2-酮，是一种新的核苷类抗病毒药，适用于慢性乙型肝炎。拉米夫定能迅速抑制HBV复制，其抑制作用持续于整个治疗过程。 

关于拉米夫定的文献很多，主要集中在合成路线和异构体拆分方面。例如，涉及拉米夫定合成路线的专利申请有CN201010141026.X、CN201010158830.9、CN20101018710524；涉及拉米夫定手性制备方面的专利申请有CN200810212154.1，CN200810212154.1，CN200910043203.8；涉及拉米夫定的杂质控制方面，最新版的USP34拉米夫定质量标准中的规定为：相对保留时间为0.4的杂质限度为0.3%，相对保留时间为0.9的杂质限度为0.2%，其他单个杂质限度为0.1%。对相对保留时间0.9的杂质做了说明，而对相对保留时间0.4的杂质并未有专门的论述和规定限度；英国药典2012版拉米夫定虽然对拉米夫定中可能含有的杂质进行了说明，但是在标准中仅以自身对照法对相对保留时间为0.36和0.91的杂质进行了限度控制，分别为主成分对照溶液的0.3%和0.2%。 

BP2012拉米夫定的质量标准(British Pharmacopoeia Volume I&II，Lamivudine(Ph. Eur.monograph 2217；Liquid chromatography (2.2.29)中指出拉米夫定产物中含有杂质A即(2R,5S)-5-(4-氨基-2-酮嘧啶-1(2H)-基)-1,3-氧硫杂戊环-2-羧酸(简称：拉米夫定酸)。 

在现有技术中，通过将六甲基二硅氮烷、胞嘧啶与(2R，5S)-((1R，2S，5R)-2-异丙基-5-甲基环己基)5-乙酰氧基-1,3-氧硫杂戊环-2-甲酸酯在溶剂中反应，得到5S-胞嘧啶-1’-基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-羧酸-(1’R，2’S，5’R)薄荷酯，然后与磷酸盐、硼氢化钠反应，得到所述拉米夫定粗产物。 

现有技术中合成的拉米夫定粗产物中通常含有杂质A[即(2R,5S)-5-(4-氨基-2-酮嘧啶-1(2H)-基)-1,3-氧硫杂戊环-2-羧酸(简称：拉米夫定酸)]，该杂质难以通过分离或提纯方法(例如通过重结晶法)从产物中除去。因此控制拉米夫定粗产物中杂质A的含量成为目前的一个难题。 

发明内容

本发明提供一种在拉米夫定产物的合成过程中快速、简单、准确地监测杂质A[即(2R,5S)-5-(4-氨基-2-酮嘧啶-1(2H)-基)-1,3-氧硫杂戊环-2-羧酸(简称：拉米夫定酸)]的含量的外标法，该方法能够利用HPLC色谱分析来准确定位和计算拉米夫定产物中杂质A的含量。本发明还利用该方法分析在合成拉米夫定的整个过程的各个步骤中工艺条件的选择对于杂质A含量的影响，并且发现拉米夫定杂质A主要来源于拉米夫定中间体5S-胞嘧啶-1’-基-1,3-氧硫杂环戊烷-2-羧酸-(1’R,2’S,5’R)薄荷酯(简称CME)的还原步骤，因此控制该步骤的反应条件成为控制杂质A含量的关键。在该还原步骤中氢氧化钠(或钾)与硼氢化钠(或钾)的比例、反应温度、反应液PH值是在该步反应中影响拉米夫定质量的关键控制因素。具体地说，优选的是，硼氢化钠(或钾):氢氧化钠(或钾)=30:1～60:1；反应温度控制在5～15℃；反应液PH值8～10；进一步优选，反应时间应该小于20小时，更优选在10-20小时，进一步优选在12-16小时。 

本发明首次通过拉米夫定中间体一步定向合成了拉米夫定杂质A，经重结晶，纯度达到98%以上，并进行了结构确证而证实获得了杂质A；然后使用HPLC色谱分析来定位杂质A和计算杂质A的含量，解决了现有方法中单独使用相对保留时间对杂质定位不准确的问题；并且通过对合成拉米夫定工艺中关键步骤控制，控制拉米夫定成品中拉米夫定杂质A的量小于0.3%。