[发明专利]一种维生素B12复合发酵助剂及其在维生素B12发酵中的应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及维生素B₁₂的制备，具体涉及一种用于维生素B₁₂发酵制备中的复合发酵助剂及其应用方法。

背景技术

维生素B₁₂为钴胺类化合物，临床上主要用于治疗恶性贫血，同时也用于治疗各种神经系统疾病和某些肝脏疾病等。

目前维生素B₁₂主要依靠脱氮假单胞菌通过好氧工艺发酵制得。发酵培养基的主要成分包括有机碳源、有机氮源、甜菜碱、少量无机盐等。其中有机物中附带的微量元素营养因子是正常机能与代谢活动不可或缺的因素，作为辅因子参与很多微生物代谢的调控，是微生物代谢调控中的一个关键环节，不同水平的辅因子可以改变特定酶活力的大小，从而重新分配碳架物质在细胞内的流向。此外，微量元素营养因子还参与调节呼吸代谢的酶活性，作为辅酶因子提高微生物对氧的利用率。但是在微生物发酵生产中，不同厂家、不同时间、不同工艺生产的有机培养物中营养因子的含量参差不齐，严重影响了发酵工艺的控制及发酵效果。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种应用于发酵中的菌株呼吸作用调节剂，同时能保证各种微量元素的恒量供应，降低因有机碳氮源中微量元素不稳定造成的发酵问题，能有效提升发酵产量的维生素B₁₂复合发酵助剂。

本发明所要解决的第二个技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种能保证各种微量元素的恒量供应，降低因有机碳氮源中微量元素不稳定造成的发酵问题，能有效提升发酵产量的维生素B₁₂复合发酵助剂在维生素B₁₂发酵中的应用方法。

为解决上述第一个技术问题，本发明的技术方案是：

一种维生素B₁₂复合发酵助剂，包含以下质量百分比的组分：90～98%的甜菜碱、0.15～0.55%的复合维生素和1.45～9.85%的复合氨基酸；所述复合维生素包含质量百分比30～55%的硫胺素、10～25%的盐酸吡哆醇和40～55%的叶酸；所述复合氨基酸包含质量百分比5～10%的赖氨酸、10～15%的丝氨酸、10～15%的谷氨酸、30～35%的天冬酰胺和30～40%的天冬氨酸。

优选的，所述甜菜碱包括无水甜菜碱、一水甜菜碱、盐酸盐甜菜碱、磷酸盐甜菜碱、磺酸甜菜碱的一种或一种以上的混合物。

优选的，所述甜菜碱中残胺的含量为0.001～0.1wt%。

为解决上述第二个技术问题，本发明的技术方案是：

一种维生素B₁₂复合发酵助剂在维生素B₁₂发酵中的应用方法，包括以下步骤：

（1）种子培养：将种子培养基灭菌之后，接种入脱氮假单胞菌菌悬液，于28～32℃、250～300rpm下振荡培养至种子液中菌体的光密度值（OD₇₀₀）达到10～15。

（2）发酵培养：将发酵培养基于115℃灭菌20分钟，将所述维生素B₁₂复合发酵助剂按照1.0～2.0wt%的添加量加入到发酵培养基中，然后按照5～10%的接种量接种入所述种子液，于28～32℃进行有氧发酵培养，搅拌或者震荡，发酵过程中补加所述维生素B₁₂复合发酵助剂，维持甜菜碱的含量为0.15～0.35g/dl，发酵时间1～7天。

优选的，所述种子培养基配方为：蔗糖3.0～5.0g/dl、玉米浆1.0～3.0g/dl、硫酸铵0.1～0.2g/dl、磷酸氢二铵0.1～0.3g/dl、硫酸锰0.07～0.09g/dl、氯化钴0.001～0.003g/dl、氧化镁0.01～0.03g/dl、5,6～二甲基苯并咪唑0.0005～0.0015g/dl、硫酸锌0.0005～0.0015g/dl和碳酸钙0.1～0.2g/dl，所述种子培养基的pH7.2～7.5。

优选的，所述发酵培养基配方为：蔗糖7.0～8.0g/dl、玉米浆6.0～7.0g/dl、硫酸铵0.05～0.1g/dl、磷酸二氢钾0.04～0.07g/dl、氯化钴0.006～0.008g/dl、氧化镁0.04～0.05g/dl、5,6～二甲基苯并咪唑0.004～0.006g/dl、硫酸锌0.005～0.008g/dl和碳酸钙0.05～0.12g/dl；所述发酵培养基的pH为7.0～7.5。