[发明专利]一种S-木薯羟腈裂解酶的提取方法及其在手性合成乙酸氰醇酯中的应用

权利要求书

1.一种S-木薯羟腈裂解酶的提取方法，其特征在于该方法是：将木薯叶作为酶源，经破碎，加入盐水溶液作为粗酶的提取液，经过滤除去滤渣后，再加入有机溶剂析出固体，经过滤获得S-木薯羟腈裂解酶，并置于冰箱中贮存；其中：

所述木薯叶为树薯或木番薯的新鲜叶子； 

所述盐水溶液是(NH₄)₂SO₄、Na₂SO₄、K₂SO_4、NH₄C和NaCl中的一种盐的水溶液，浓度为0.02~0.1 mol/L； 

所述有机溶剂是甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、四氢呋喃和乙腈中的一种，其用量为提取液体积的1~5倍。

2.一种权利要求1所得S-木薯羟腈裂解酶的应用，其特征在于所述S-木薯羟腈裂解酶直接作为手性催化剂，应用于催化醛与氢氰酸、丙酮氰醇、KCN或NaCN氰源的手性加成反应，高收率地获得高光学纯的氰醇产物，通过简单连续的乙酰化反应，生成较稳定的各种手性乙酰氰醇酯；具体反应如下： 

作为反应物使用的醛类化合物具体指下述化合物：

式中R为：C₃H₇-；C₂H₅OCH₂C(CH₃)₂-；CH₂CHOCH₂C(CH₃)₂-； CH₃COOCH₂C(CH₃)₂-；C₆H₅CH₂OCH₂C(CH₃)₂-；C₆H₅-；4-CH₃O-C₆H₅-；3-CH₃O-C₆H₅-；2-CH₃O-C₆H₅-；4-F-C₆H₅-；4-Cl-C₆H₅-；2-Cl-C₆H₅-；4-Br-C₆H₅-；3- C₆H₅O-4-F-C₆H₅-；苯乙烯基；2-萘基；2-呋喃基；3-呋喃基；2-噻吩基；3-噻吩基；5-甲基-噻吩基；5-氯-噻吩基；5-溴-噻吩基；取代基中的1个；

S-木薯氰醇裂解酶的用量为0.1~2g/mmol醛； 

氰源使用氢氰酸或丙酮氰醇；或者使用KCN或NaCN加乙酸；氰源的用量为醛摩尔量的1~3.0倍； 

若使用KCN或NaCN加乙酸，则乙酸的用量为KCN或NaCN摩尔量的1~3.0倍；

本发明的第一步反应在水-有机溶剂两相体系中进行，其中有机溶剂为异丙醚，乙酸乙酯和甲苯中的一种，有机溶剂与醛类化合物的摩尔比为10∶1～1∶1，水-有机溶剂的体积比1∶9～7∶3；

反应的程序是：加入酶、氰源、溶剂并搅拌均匀，滴加醛，反应24~72小时；将经分液后得到的有机相滴加到盛有乙酸酐和吡啶的摩尔比为1∶1、其用量为醛摩尔量的1~2.0倍的混合液中，室温反应3~24小时；经饱和碳酸氢钠和水洗、干燥、浓缩处理后，获得相应的目标化合物。