[发明专利]青蟹双顺反子病毒检测用引物组、检测方法和快速诊断试剂盒有效
| 申请号： | 201210223292.6 | 申请日： | 2012-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN102766700A | 公开（公告）日： | 2012-11-07 |
| 发明（设计）人： | 郭志勋;张迪;冯娟;苏友禄;徐力文 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院南海水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州知友专利商标代理有限公司 44104 | 代理人： | 宣国华 |
| 地址： | 510300 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 青蟹双 顺反子 病毒 检测 引物 方法 快速 诊断 试剂盒 | ||
1.一种青蟹双顺反子病毒检测用引物组，其特征在于该引物组由如下四条引物组成：
内引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
内引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
2.一种青蟹双顺反子病毒的检测方法，其特征在于：该方法是利用权利要求1所述的引物组通过LAMP反应和反应后的显色反应，对待测样品中是否含有青蟹双顺反子病毒进行检测。
3.根据权利要求2所述的青蟹双顺反子病毒的检测方法，其特征在于：LAMP反应的反应体系含有权利要求1中所述的引物组、LAMP反应液、Bst DNA聚合酶和cDNA。
4.根据权利要求2所述的青蟹双顺反子病毒的检测方法，其特征在于：所述引物组中内、外引物的摩尔浓度比为2~9:1。
5.根据权利要求2所述的青蟹双顺反子病毒的检测方法，其特征在于：所述引物组中内、外引物的摩尔浓度比为4:1。
6.根据权利要求2所述的青蟹双顺反子病毒的检测方法，其特征在于：LAMP反应时的反应温度为56.2~64.5℃，反应时间为40~70min。
7.根据权利要求2所述的青蟹双顺反子病毒的检测方法，其特征在于：显色反应时采用的显色液为SYBR Green I。
8.一种青蟹双顺反子病毒快速诊断试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含如下组分：
(1)权利要求1中所述的引物组；
(2)阳性对照品：含有青蟹双顺反子病毒外壳蛋白基因的质粒；
(3)显色液；
(4)LAMP反应液；
(5)Bst DNA聚合酶。
9.根据权利要求8所述的青蟹双顺反子病毒快速诊断试剂盒，其特征在于：所述的显色液为SYBR Green I。
10.根据权利要求8所述的青蟹双顺反子病毒快速诊断试剂盒，其特征在于：LAMP反应液含有1×反应缓冲液、0.2~1.8mM dNTPs、0~1.6M甜菜碱和4~14μMMgSO4。
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