[发明专利]波生坦及其制剂的有关物质的含量测定的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物的检测方法，具体涉及一种波生坦及其制剂的有关物质和含量的检测方法。

背景技术

波生坦(bosentan)，其化学名为4-叔丁基-N-[6-(2-羟基-乙氧基)-5-(2-甲基-苯氧基)-[2，2’]-二嘧啶-4-基]-苯璜酰胺一水化合物。其结构式为：

波生坦是一种特异性，竞争性的双重内皮素受体阻滞剂，具有对ETA和ETB受体的亲和作用，与ETA受体的亲和力比与ETB受体的亲和力稍高。能降低血管压力，阻止心脏和血管增生，减轻肺纤维化和炎症，临床用于治疗休息或轻微运动时出现呼吸困难症状的肺动脉高压患者，以及用于改善运动耐力及相关症状。美国FDA于2001年11月20日批准埃科特莱茵(ACTELION)药品公司的波生坦口服片剂上市。

波生坦和波生坦片的有关物质和含量的检测方法尚未见报道，其测定方法的难度在于波生坦是一个难溶于水的物质，而且在其合成的过程中中间体和产生的杂质比较的多，性质与波生坦的比较相近，难于分离。

发明内容

本发明的目的是提供一种能测定波生坦和波生坦片的有关物质和含量的方法。

检测方法为高效液相色谱法：

色谱柱：用十八烷基键合硅胶为填充剂；

流动相：乙腈-庚烷磺酸钠溶液

检测波长：212～222nm；

其中：流动相中庚烷磺酸钠溶液为0.02mol/L～0.03mol/L的庚烷磺酸钠水溶液。

流动相中庚烷磺酸钠溶液要用磷酸调pH至2.8～3.2。

乙腈与庚烷磺酸钠溶液的体积比为60∶40～70∶30。

其波生坦及其制剂有关物质含量测定的方法，步骤如下：

1.取样品适量，加流动相配制成浓度为0.5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；

2.量取供试品溶液1ml置100ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；

3.取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的10％～20％；再精密量取供试液和对照溶液各20μl分别进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的3.0倍。计算有关物质含量。

4.色谱条件：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水相(0.025mol/L的庚烷磺酸钠水溶液，用磷酸调pH至3.0)-乙腈(35∶65)为流动相，检测波长为217nm；流速为1.0ml/min。理论板数按波生坦峰计算应不低于6000。

其中所述的有关物质含量为波生坦合成过程中带入的杂质，包括溶剂，原料，中间体，副产物等，杂质成分为限制成分，测定有关物质目的在于限制其含量。

本发明测定方法的特点是：被分析物中各成分见分离彻底，可操作性强，分析方法专属性强，准确性和灵敏度高，适应性强为保证药品安全，有效，可控提高依据。

附图说明

图1为以醋酸铵为流动相的色谱图，1、波生坦，2、胺化物，3、二氯物，4、二酮；

图2为以庚烷磺酸钠为流动相的专属性色谱图，1、波生坦，2、二酮，3、二氯物，4、未知杂质，5、胺化物；

图3为样品有关物质测定色谱图，1、波生坦，2、二酮，3、二氯物，4、未知杂质；

图1、图2、图3中胺化物、二酮、二氯物是波生坦合成过程中带入的杂质。

具体实施方式

实施例1波生坦有关物质测定

1.实验仪器及色谱条件

岛津LC-10Atvp色谱仪，Venusil MP C18 5μm4.6*250mm色谱柱，流动相为乙腈-0.025mol/L庚烷磺酸钠溶液(用磷酸调节PH至3.0)(60∶40)～(70∶30)；检测波长：212～222nm；流速：0.8ml/min～1.2ml/min；配制的样品浓度约0.1～1.0mg/ml；进样量：5～200ul。

2.试剂

庚烷磺酸钠(HPLC级)，磷酸(AR级)，乙腈(HPLC级)。

3.色谱条件的选择

(1)流动相