[发明专利]血管紧张素Ⅰ化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体的涉及血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法。 

背景技术

高血压（Hypertension）是一种世界性的常见疾病，世界各地的患病率高达10%~20%，并可导致脑血管、心脏、肾脏的病变，是危害人类健康的主要疾病。据卫生部最新数据，我国现有高血压患者2亿多人，随着经济发展，人民生活水平的提高，高血压已日益成为一个重要的公共卫生问题。 

血管紧张素Ⅰ（AngiotensinⅠ，AngⅠ）由肾素作用于血管紧张素原形成。肾素能催化血管紧张素原亮氨酸（Leu）与缬氨酸（Val）间的肽键水解产生十肽血管紧张素Ⅰ。血管紧张素Ⅰ在正常血浆浓度下没有生物学活性，而是作为血管紧张素Ⅱ的前体存在。血管紧张素Ⅰ能刺激肾上腺髓质分泌肾上腺素，它直接收缩血管的作用不明显；血管紧张素Ⅱ能使全身小动脉收缩而升高血压，此外，还可促进肾上腺皮质分泌醛固酮，醛固酮作用于肾小管，起保钠、保水、排钾作用，从而引起血量增多，血压升高。 

正常情况下，由于肾素分泌很少，血中血管紧张素也少，对血压调节不起明显作用。但当大失血时，由于动脉血压显著下降使肾血流量减少，血管紧张素生成增多，对防止血压过度下降而使血压回升却起重要作用。肾血管长期痉挛或狭窄的患者，因肾血流量减少，血管紧张素生成增多可导致肾性高血压。此外，血管紧张素可引起血管强烈收缩，但在正常情况下不参与血 压调节。当机体处于失血等情况而使循环血量减少时，该激素在血中浓度将显著升高，对保持循环血量和维持动脉血压起一定作用. 

目前对血管紧张素Ⅰ目前临床上常用的测定血管紧张素Ⅰ的方法是放射免疫分析技术（RIA）和酶联免疫分析法（ELISA），但是这两种方法存在诸多不足，例如RIA存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤，且操作繁琐，时间长等缺点；而ELISA灵敏度低，检测范围窄；随着标记免疫技术的迅速发展，各种新的检测方法层出不穷，例如ELISA方法、时间分辨免疫分析法、免疫荧光法、化学发光发等。其中，化学发光免疫分析（CLIA）是将化学发光和酶免疫分析结合在此技术上发展起来的，起步于80年代初，在90年代得到了快速发展和应用，是当今最为敏感的微量免疫测定法，具有灵敏度高（检测极限10^-17-10^-19）、可测定物质浓度范围宽、试剂有效期长、操作简单快速、稳定性好、安全无环境污染等优点，目前以广泛应用到基础和临床医学的各个领域，成为取代RIA和ELISA的首选技术。 

发明内容

本发明要解决的问题是提供血管紧张素Ⅰ的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，解决了灵敏度低，检测范围窄的缺陷。 

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种血管紧张素Ⅰ化学发光免疫定量检测试剂盒包括：AngⅠ抗体包被板、辣根过氧化物酶标记的AngⅠ、AngⅠ校准品、AngⅠ质控品、发光液A液和B液、20倍浓缩洗液。 

所述的血管紧张素Ⅰ抗体包被板的固相载体为96孔或48孔的白色微孔 板。所述的血管紧张素Ⅰ化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述的辣根过氧化物酶纯度要求RZ≥3.0，活性≥250U/mL。所述的发光液A包含0.7g/L鲁米诺和0.165g/L对碘酚；发光液B包含0.675g/L过氧化脲。所述的20倍浓缩洗液包括75.5g/L Tris，120g/L NaCl，5mL/L Tween-20，1g/LProclin300。 

一种制备上述试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤： 

1）AngⅠ抗体包被板制备 

将AngⅠ抗体用pH9.6碳酸盐缓冲液稀释至1-10ug/mL，在每个微孔板的孔中加100uL，于4℃冰箱中放置过夜，用洗涤液洗涤五次之后，用牛血清蛋白溶液对微孔板进行封闭，弃去孔内液体后，将酶标板干燥，密封，即得经AngⅠ抗体包被的微孔板； 

2）辣根过氧化物酶标记AngⅠ，得AngⅠ酶结合物； 

利用高碘酸钠氧化法，将AngⅠ与辣根过氧化物酶连接在一起，形成经辣根过氧化物酶标记的AngⅠ； 

3）AngⅠ校准品； 

将AngⅠ抗原用校准品稀释液稀释成系列浓度（浓度分别为0，0.2，0.5，2，5，12ng/mL），于2~8℃保存备用。 

4）AngⅠ质控品的配制：在正常人血清中加入适量的AngⅠ纯品，配制低值质控品（QcL）和高值质控品（QcH），其浓度的平均值分别为0.46ng/mL和10.35ng/mL。