[发明专利]一种由牙龈组织培养间充质干细胞和成纤维组织的方法

权利要求书

1.一种由牙龈组织培养间充质干细胞和成纤维组织的方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：

a．从活体牙龈中抽取牙龈组织，将牙龈组织置于组织保持液中保存，所述组织保持液包含有MEM培养基底液、牛血清、抗生素和抗真菌素；

b．以磷酸盐缓冲液对所述牙龈组织进行清洗,再加入胶原蛋白酶对所述牙龈组织进行消化；

c．对消化后的混合液进行离心分离，得到细胞团；

d．将上述细胞团置于含有MEM培养基底液的培养瓶中培养，收集培养得到的细胞并将所述细胞悬浮于磷酸盐缓冲液中；

e．在步骤d的磷酸盐缓冲液中加入带有磁铁的成纤维细胞抗体，混合后静置反应；

f．将步骤e反应后的产物置于磁化细胞分离器的分离管中，加入磷酸盐缓冲液进行分离，收集磁化细胞分离器的洗脱物即为间充质干细胞；

g.取出所述分离管，加入磷酸盐缓冲液到分离管中,利用柱塞将分离管中的细胞压出，收集得到的细胞即为成纤维细胞。

2.根据权利要求1所述的由牙龈组织培养间充质干细胞和成纤维组织的方法，其特征在于，所述组织保持液包含有MEM培养基底液、体积分数为5-20%的牛血清、80-120U/ml的抗生素和0.25-2.5ug/ml抗真菌素。

3.根据权利要求1所述的由牙龈组织培养间充质干细胞和成纤维组织的方法，其特征在于，所述步骤b中胶原蛋白酶的浓度为50-100U/ml。

4.根据权利要求1所述的由牙龈组织培养间充质干细胞和成纤维组织的方法，其特征在于，所述步骤c中，离心的转速为1000-2500rpm,离心时间为3-5分钟。

5.根据权利要求1所述的由牙龈组织培养间充质干细胞和成纤维组织的方法，其特征在于，所述步骤d中利用质量体积比为0.2-0.3%的胰蛋白酶或dispase分散酶收集培养得到的细胞。

6.根据权利要求1所述的由牙龈组织培养间充质干细胞和成纤维组织的方法，其特征在于，所述步骤e中成纤维细胞抗体的加入量为10-30ul每四百万颗细胞。

7.根据权利要求1所述的由牙龈组织培养间充质干细胞和成纤维组织的方法，其特征在于，所述步骤f中还包括，重复加入磷酸盐缓冲液进行分离，再收集洗脱物。

8.根据权利要求1所述的由牙龈组织培养间充质干细胞和成纤维组织的方法，其特征在于，所述步骤g中还包括，重复加入磷酸盐缓冲液到分离管中,利用柱塞将分离管中的细胞压出，收集得到的细胞即为成纤维细胞。

9.根据权利要求1所述的由牙龈组织培养间充质干细胞和成纤维组织的方法，其特征在于，所述步骤g后还包括，将收集到的间充质干细胞和成纤维组织分别置于含有细胞培养液的培养瓶进行培养，得到目标数量的间充质干细胞和成纤维组织。