[发明专利]NT-proBNP双抗夹心快速检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于临床医学诊断领域，具体涉及一种NT-proBNP双抗夹心快速检测试剂盒。

背景技术

心力衰竭是一种常见的临床综合征，由于其严重性和高额的治疗护理费用，该病症的早期诊断显然是十分必要的。人们一直致力于寻找预测心力衰竭症状发生前标志物。目前研究表明心肌细胞产生并分泌具有排钠利尿活性的肽：心房来源的肽，其为de Bold等人在大鼠中发现的ANP（心房钠尿肽）（Life Science 1981, vol.28(1):89-94）和专利EP 418 308的发明者及Sudoh等人(1988)Nature 332:78-81在猪和人中发现的BNP（脑钠尿肽）。

人类BNP基因片段位于1号染色体断臂，其上游与ANP基因片段相连，由1900个核苷酸组成。mRNA含900-1000个核苷酸。表达产物含信号肽。信号肽降解后的产物为前体BNP (pro-BNP)，含108个氨基酸：

HPLGSPGSASDLETSGLQEQRNHLQGKLSELQVEQTSLEPLQESPRPTGVWKSREVATEGIRGHRKMVLYTLRAPR₇₆S₇₇PKMVQGSGCFGRKMDRISSSSGLGCKVLRRH₁₀₈。

它在其分泌过程之前和/或之中在氨基酸Arg76和Ser77之间进行切割，从而被切割成BNP，也被称为BNP(77-108)或BNP-32或BNP(1-32)，以及该激素原的N端部分，BNP(1-76)，也被称为proBNP的N端片段或NT-proBNP。

目前，体外诊断市场中比较权威和常用的NT-proBNP测试为Roche诊断公司的全自动Elecsys?NT-proBNP检测。该检测原理是夹心反应及电化学发光检测，设计用于大规模中心实验室，并且为了进行测试，除了精确计量的液体试剂外，还需要相对复杂的仪器来定量液体和检测发光信号，操作比较繁琐和复杂。该检测的多克隆抗体（PAB）是NT-proBNP的一种非常特别的部分，能够识别包括1-21和39-50位氨基酸的NT-proBNP的表位。然而，研究表明这些多克隆抗体不适用于采用颗粒标记例如胶体金作为标记物的NT-proBNP快速检测，因为由于快速检测的组分之间的物理化学相互作用，这类抗体在信号产生方面显示出令人不满意的可变性。这导致在不同批次间测试效果具有相当大的波动性。

中国专利200410095878.4提供了一种采用特殊抗体组合的用于测定NT-proBNP的免疫快速测试，虽然解决了Elecsys?NT-proBNP检测操作繁琐的特点。然而，其所采用的最优抗体组合MAB18.4.34(27-31)与PAB(39-50)在敏感度和实际临床测试方面不尽如人意。Hughes,D.等，Clin. Sci. 96 (1999) 373-380，报道了由proBNP氨基酸37-49相应肽所产生的并与之反应的抗体并不与完整的内源proBNP反应。根据这样的测定，无法区别患有左心室功能障碍的患者和正常对照。

因此，关于心力衰竭的早期诊断，对于改善用检测N-末端proBNP的试剂盒方法总存在着需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种敏感度更高、更适宜用于临床检测的试剂盒，用于快速测定NT-proBNP。

本发明的目的可通过以下技术方案予以实现：

一种NT-proBNP双抗夹心快速检测试剂盒，包括试纸条底衬，以及试纸条底衬上顺次相互搭接粘贴的样品垫、涂覆抗体-颗粒标记物的聚酯膜、包被膜及吸水纸，包被膜上设有相互平行的包被鼠抗人IgG抗体的控制线和检测线，所述检测线包被有与待检抗原特异性结合的抗体。

本发明中采用的术语PAB(X-Y)表示一种多克隆抗体，其靶向包括X到Y位的氨基酸的NT-proBNP表位。MAB (X-Y)为一种靶向包括X至Y位氨基酸的NT-proBNP表位的单克隆抗体。

所述抗体-颗粒标记物，优选MAB（10-39）被固定于颗粒标记物。

所述颗粒标记物为彩色的乳胶、金属溶胶标记物、聚合物标记物或半导体纳米微晶体，优选金标记物。

所述包被膜抗体，优选PAB(59-71)包被在包被膜上。

所述PAB（59-71）来源于免疫哺乳动物，尤其是绵羊、山羊或兔子。

所述MAB（10-39）购自南京强欣生物技术有限公司。

所述PAB（59-71）的制备方法，步骤如下：

1）克隆如SEQ ID NO:1所示的基因片段；