[发明专利]一种制备α-淀粉酶的方法及其专用菌株与相关蛋白

说明书

技术领域

本发明涉及食品生物技术领域，尤其涉及一种制备α-淀粉酶的方法及其专用菌株与相关蛋白。

背景技术

α-淀粉酶[EC.3.2.1.1]属于糖苷水解酶类第13家族，作用于淀粉分子内部切开ɑ-1,4-糖苷键,生成糊精和还原糖,产物的末端残基碳原子为α构型，故称为α-淀粉酶。α-淀粉酶是一种重要的工业用酶制剂，也是最早实现工业生产并且迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂品种，已广泛应用食品、饲料、发酵以及纺织等工业中（张志国等,2005）。α-淀粉酶广泛存在于细菌、真菌、植物以及动物等各种生物体中，自1956年首次分离α-淀粉酶的报道以来，目前已经有120多种α-淀粉酶得到了分离和鉴定。α-淀粉酶的生产主要以微生物发酵为主，生产菌株主要有不同种属的细菌如枯草杆菌、地衣芽孢杆菌等，以及真菌如黑曲霉、米曲霉和根霉等。迄今，已有大量的细菌发酵生产α-淀粉酶的研究报道，然而，真菌发酵产α-淀粉酶的研究较少（Ashok et al，2000）。

随着α-淀粉酶研究的不断深入，已发现部分α-淀粉酶能同时水解多种葡聚糖及葡寡糖当中的α-1,4和α-1,6糖苷键，即同时具有麦芽糖淀粉酶、普鲁兰酶以及环糊精酶等多功能淀粉酶活性（Shimura et al,2001;Yang et al,2004;Yun et al,2004;Takeuchi et al，2006;Champreda et al,2007;Kato et al，2007;Hostinova et al,2010），其中有少数α-淀粉酶还具有葡萄糖基转移酶功能（Kim et al，1992;Shimura et al,2001;Yun et al,2004）。目前已发现和报道的多功能α-淀粉酶多数属于耐热酶，因此应用于淀粉加工时也较传统淀粉酶稳定，它们可以水解淀粉生成异麦芽低聚糖、麦芽低聚糖以及少量的葡萄糖。近来，多功能α-淀粉酶以其独特的催化功能多样性引起了人们的很大关注。应用多功能α-淀粉酶可以实现单酶生产，即以简单的一步催化水解淀粉生成异麦芽低聚糖和麦芽低聚糖，而且产品中副产物较少，产品质量较高，有些产品甚至不需要纯化而直接应用。因此，多功能α-淀粉酶在现代食品工业以及医药工业等领域中占有重要的地位，具有广阔的应用前景。

目前，世界各国都在致力于开发多功能淀粉酶，以期待降低生产麦芽低聚糖的成本。我国淀粉资源非常丰富，而且具有分布广、产量大、价格低等特点。以淀粉为原料生产高质量的麦芽低聚糖有望成为我国主要的功能性、健康性糖原，但是其生产的前提是要开发出理想的多功能淀粉酶。

发明内容

本发明的一个目的是提供樟绒枝霉（Malbranchea cinnamomea）S168。

本发明提供的樟绒枝霉（Malbranchea cinnamomea）S168，其保藏号为CGMCC NO.6022。

上述的樟绒枝霉（Malbranchea cinnamomea）S168 CGMCC NO.6022在制备α-淀粉酶中的应用也是本发明保护的范围。

本发明的另一个目的是提供一种制备α-淀粉酶的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：发酵上述的樟绒枝霉（Malbranchea cinnamomea）S168 CGMCC NO.6022，收集发酵产物，即得到α-淀粉酶。

上述方法中，所述发酵温度为30-45°C，所述发酵时间为3-5天，所述发酵为180-220rpm震荡培养。

上述发酵培养基的配方如下：糯米粉35.0g，蛋白胨12.0g，酵母提取物24.0g,KH₂PO₄ 1.0g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.01g，NaCl 0.5g，CaCl₂ 0.2g，MnSO₄·7H₂O 0.05g，用水定容至1L。

本发明的第三个目的是提供一种蛋白。

本发明提供的蛋白，来源于樟绒枝霉（Malbranchea cinnamomea）S168，是如下（a）或（b）：

（a）由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（b）将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列2衍生的蛋白质。