[发明专利]三元表达元件、包含该元件的真核表达载体及其用途

权利要求书

1.三元表达元件，为将多克隆位点MCS、二氢叶酸还原酶编码基因DHFR及增强型绿色荧光蛋白编码基因EGFP通过内源性核糖体进驻位点IRES串联得到的连锁表达元件。

2.根据权利要求1所述的三元表达元件，其特征在于：所述连锁表达元件的结构为MCS-IRES-DHFR-IRES-EGFP或MCS-IRES-EGFP-IRES-DHFR。

3.根据权利要求1所述的三元表达元件，其特征在于：所述表达元件的核苷酸序列为SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示；或者在SEQ ID No.1或SEQ ID No.2的基础上取代和/或缺失和/或添加至少一个核苷酸衍生所得的核苷酸序列，该核苷酸序列仍能起相同和相似的作用。

4.根据权利要求1～3任一项所述的三元表达元件，其特征在于：其上游还可操作地连接有启动子。

5.根据权利要求1～4任一项所述的三元表达元件，其特征在于：其下游还连接有终止序列。

6.根据权利要求1～5任一项所述的三元表达元件，其特征在于：在多克隆位点MCS内接入有表达基因序列，可使待表达基因序列与DHFR和EGFP一起连锁表达。

7.三元表达载体，其特征在于：含有权利要求1～6任一项所述的三元表达元件。

8.根据权利要求7所述的三元表达载体，其特征在于：在所述三元表达元件外设置唯一的稀有酶切位点。

9.根据权利要求7所述的三元表达载体，其特征在于：所述三元表达元件的下游还含有复制原点。

10.根据权利要求7所述的三元表达载体，其特征在于：所述三元表达元件的下游还可操作的连接有抗性筛选基因。

11.根据权利要求10所述的三元表达载体，其特征在于：载体抗性基因的下游还可操作的连接有pUC复制原点pUC ori。

12.根据权利要求7～11任一项所述的三元表达载体，其特征在于其元件依次为启动子、多克隆位点、内源性核糖体进驻位点、二氢叶酸还原酶基因、内源性核糖体进驻位点、增强型绿色荧光蛋白基因、poly A终止信号、SV40复制原点SV40 ori、卡那霉素抗性基因与pUC复制原点pUC ori；或者其元件依次为启动子、多克隆位点、内源性核糖体进驻位点、二氢叶酸还原酶基因、增强型绿色荧光蛋白基因、内源性核糖体进驻位点、poly A终止信号、SV40复制原点SV40 ori、卡那霉素抗性基因与pUC复制原点pUC ori。

13.根据权利要求7～11任一项所述的三元表达载体，其特征在于所述三元表达载体的核苷酸序列为SEQ ID No.2或SEQ ID No.4所示。

14.权利要求1～6任一项所述的三元表达元件在制备基因表达载体中的用途或权利要求7～12任一项所述的三元表达载体在建立和/或筛选稳定高表达基因工程细胞株中的用途。