[发明专利]硫酸阿米卡星注射液中杂质的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种硫酸阿米卡星注射液中杂质的检测方法，具体涉及以柱前衍生化-HPLC法对硫酸阿米卡星注射液中已知杂质D卡那霉素的检测方法。

背景技术

硫酸阿米卡星注射液的主要成分是硫酸阿米卡星，本品对多数肠杆菌科细菌如大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属等均具有良好作用，可用于治疗革兰阴性杆菌所致的各种严重感染等。

欧洲药典、英国药典中均指明了硫酸阿米卡星注射液中有四种已知杂质，分别为杂质A、B、C、D，而中国药典中仅仅控制了已知杂质A，该杂质为合成过程中产生的杂质，在注射液生产及贮存过程中，杂质A的量不会增加。而已知杂质D卡那霉素为降解杂质，在制剂制备及贮存过程中含量会有所增加。且卡那霉素的肾毒性和耳毒性均强于阿米卡星，临床应用卡那霉素后还会产生造血系统毒性反应，引起白细胞减少，严格控制其限度是化学分析工作中的重要环节。

按照《中国药典》2010年版硫酸阿米卡星注射液有关物质项下方法对已知杂质D进行方法学考察，主药硫酸阿米卡星浓度为10mg/mL时，杂质D卡那霉素的平均回收率较低，为66.29%，RSD为19.6%；欧洲药典、英国药典中规定衍生化样品应贮存在10℃环境下，经考察，在该温度下，样品稳定性较差，24h内测得卡那霉素的含量下降了76.5%。可见，采用药典方法对杂质D卡那霉素进行定量测定是不准确的。因此，提供一种硫酸阿米卡星注射液中已知杂质卡那霉素的检测方法，是有关方面所十分需要的。

发明内容

本发明所解决的技术问题是现有检测方法中回收率低、稳定性差的缺点，提供一种准确、稳定的检测方法，用于检测硫酸阿米卡星注射液中已知杂质D卡那霉素的含量。

本发明一方面一种检测硫酸阿米卡星注射液中杂质D卡那霉素的含量的方法，所述方法包括以下步骤：

量取硫酸阿米卡星注射液，加水稀释制成每1mL中含硫酸阿米卡星1-5mg的溶液，经衍生化处理后，作为测试溶液；

量取卡那霉素对照品，加水稀释成每1mL中含10-50μg卡那霉素的溶液，经衍生化处理后，作为卡那霉素对照品溶液；

量取卡那霉素对照品溶液5-100μL注入高效液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的30-60%；

量取测试溶液与对照品溶液各10-100μL，分别注入高效液相色谱仪；测试溶液的色谱图中如有与卡那霉素保留时间一致的色谱峰，根据卡那霉素标准曲线得到测试溶液中杂质卡那霉素的含量。

在本发明的一个优选实例中，所述衍生化处理包括：量取0.2mL待处理溶液至10mL量瓶中，加1.0%的2,4,6-三硝基苯磺酸溶液2mL和吡啶3mL；然后强力振摇30秒；将量瓶置水浴保温2小时，然后在冷水中冷却2分钟；然后在量瓶中加入冰醋酸2mL；强力振摇30秒后用水稀释至刻度，并摇匀。

在本发明的一个优选实例中，所述水浴的温度为50-100℃，较好60-90℃，更好为70-80℃，最好75℃。

在本发明的一个优选实例中，所述盐酸阿米卡星注射液一般加水稀释制成每1mL中含硫酸阿米卡星1-4mg的溶液，更好加水稀释制成每1mL中含硫酸阿米卡星1-3mg的溶液，最好加水稀释制成每1mL中含硫酸阿米卡星2mg的溶液。

在本发明的一个优选实例中，卡那霉素对照品加水稀释成每1mL中含15-40μg卡那霉素的溶液，更好加水稀释成每1mL中含15-30μg卡那霉素的溶液，最好加水稀释成每1mL中含20μg卡那霉素的溶液

在本发明的一个优选实例中，量取卡那霉素对照品溶液10-90μL注入高效液相色谱仪，更好量取卡那霉素对照品溶液20-80μL注入高效液相色谱仪，最好量取卡那霉素对照品溶液40-60μL注入高效液相色谱仪。

在本发明的一个优选实例中，主成分色谱峰的峰高为满量程的30-60%，较好为满量程的40-60%，更好为满量程的45-55%，最好为满量程的55%。

在本发明的一个优选实例中，量取测试溶液与对照品溶液各10-100μL分别注入高效液相色谱仪，较好量取测试溶液与对照品溶液各10-90μL分别注入高效液相色谱仪，量取测试溶液与对照品溶液各20-80μL分别注入高效液相色谱仪，量取测试溶液与对照品溶液各40-60μL分别注入高效液相色谱仪。

在本发明的一个优选实例中，上述测试溶液和对照品溶液存放在5-40℃环境中，较好在10-30℃环境中，更好在20-25℃环境中，最好为室温。