[发明专利]检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒及其抗体的间接ELISA试剂盒

权利要求书

1.一种检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于该试剂盒包括：已包被有抗嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒 DS10株单克隆抗体、并结合了嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒DS10株灭活纯化抗原的酶标板。

2.根据权利要求1所述检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于：采用如下方法制备所述酶标板：

（a）向酶标板的每孔中分别加入100μL浓度为0.59～9.44 μg/mL的抗嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒DS10株单克隆抗体溶液，4℃包被过夜；

（b）洗涤；

（c）用牛血清白蛋白溶液封闭，洗涤；

（d）向酶标板的每孔中分别加入100 μL浓度为104.2～208.4μg/mL的嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒 DS10株灭活纯化抗原溶液，37℃孵育1.5 h，洗涤。

3.根据权利要求2所述检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于：步骤（a）中所述加入到酶标板每孔中的抗嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒 DS10株单克隆抗体溶液的浓度为2.36 μg/mL。

4.根据权利要求2所述检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于：步骤（d）中所述加入到酶标板每孔中的嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒 DS10株灭活纯化抗原溶液的浓度为138.90 μg/mL。

5.根据权利要求4所述检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于：该试剂盒还包括：

（1）10×洗涤液：pH7.4，体积100 mL；所述10×洗涤液是含有质量浓度分别为5% Tween-20、8%氯化钠、0.2%氯化钾、2.9%磷酸氢二钠和0.2%磷酸二氢钾的水溶液；

（2）10×血清稀释液：pH7.4，体积100 mL；所述10×血清稀释液是含有质量浓度分别为5%牛血清白蛋白、5% Tween-20、8%氯化钠、0.2%氯化钾、2.9%磷酸氢二钠和0.2%磷酸二氢钾的水溶液；

    （3）酶标试剂：辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG，25 mL；

（4）底物显色液，包括：

A液：将1 mL浓度为10 mg/mL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液加入到100 mL 浓度为0.1 mol/L、pH为6.0的磷酸缓冲液中配成；所述浓度为0.1 mol/L、pH为6.0的磷酸缓冲液的配制方法为：0.1 mol/L磷酸二氢钠水溶液87.7 mL和0.1 mol/L磷酸氢二钠水溶液12.3 mL混合即成；

B液：体积浓度为3%的H₂O₂水溶液，10 mL；

    （5）终止液：2 mol/L的H₂SO₄溶液100 mL；

（6）标准阳性血清：即标准IBV抗体阳性血清，0.5 mL； 

（7）标准阴性血清：即标准IBV抗体阴性血清，0.5 mL。

6.  一种检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒的间接ELISA试剂盒，其特征在于该试剂盒包括：已包被有抗嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒 DS10株单克隆抗体的酶标板。

7.    根据权利要求6所述检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒的间接ELISA试剂盒，其特征在于：所述酶标板的制备方法如下：

（a）在酶标板的每孔中分别加入100 μL浓度为0.59～9.44μg/mL的抗嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒 DS10株单克隆抗体溶液，4℃包被过夜；

（b）洗涤；

（c）用牛血清白蛋白溶液封闭，洗涤。

8.根据权利要求7所述检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒的间接ELISA试剂盒，其特征在于：所述加入到酶标板每孔中的抗嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒DS10株单克隆抗体溶液浓度为2.36 μg/mL。

9.根据权利要求8所述检测嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒的间接ELISA试剂盒，其特征在于：该试剂盒还包括：

（1）10×洗涤液：pH7.4，体积100 mL；所述10×洗涤液是含有质量浓度分别为5% Tween-20、8%氯化钠、0.2%氯化钾、2.9%磷酸氢二钠和0.2%磷酸二氢钾的水溶液，；

（2）10×血清稀释液：pH7.4，体积100 mL；所述10×血清稀释液是含有质量浓度分别为5%牛血清白蛋白、5% Tween-20、8%氯化钠、0.2%氯化钾、2.9%磷酸氢二钠和0.2%磷酸二氢钾的水溶液，； 

（3）酶标试剂：辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG，25 mL；

（4）底物显色液，包括：

A液：将1 mL浓度为10 mg/mL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液加入到100 mL 浓度为0.1 mol/L、pH为6.0的磷酸缓冲液中配成；所述浓度为0.1 mol/L、pH为6.0的磷酸缓冲液的配制方法为：0.1 mol/L磷酸二氢钠水溶液87.7 mL和0.1 mol/L磷酸氢二钠水溶液12.3 mL混合即成；

B液：体积浓度为3%的H₂O₂水溶液10 mL；

（5）终止液：2 mol/L的H₂SO₄溶液，100 mL；

（6）标准阳性血清：即标准IBV抗体阳性血清，0.5 mL；

（7）标准抗原：嗜肾型IBV DS10株灭活纯化抗原，1 mL；

（8）阴性标准品对照：13日龄SPF鸡胚尿囊液，1 mL。