[发明专利]常染色体隐性非综合征型耳聋致病基因

说明书

技术领域

本发明涉及常染色体隐性疾病，更具体而言本发明涉及常染色体隐性非综合征型耳聋致病基因。

背景技术

耳聋（hearing loss,HL）是导致语言交流障碍的最常见疾病，一般新生儿耳聋的发病率可达到1/1000，在不发达国家中新生儿耳聋发病率甚至可高达1/500¹。作为有着13亿人口的中国，每年有近3万名先天性神经感音性耳聋患儿出生。鉴定分离导致耳聋的致病基因，明确耳聋发生的分子机制，通过产前基因诊断和预防等有效措施来降低耳聋的发生率，是防聋治聋的根本途径之一。

单基因遗传的耳聋占全部耳聋50%，其中70％是以耳聋为唯一临床表现的非综合征耳聋。非综合征型耳聋具有高度的遗传异质性，80%是常染色体隐性遗传²。占比例最大的常染色体隐性非综合征型耳聋（autosomal recessive nonsyndromic hearing loss,ARNSHL）,是利用经典的耳聋家系定位和鉴定分离致病基因的研究热点。据Hereditary Hear Loss Homepage（HHH）提供的最新信息可知，已定位或分离的ARNSHL基因有63个，其中克隆分离到的致病基因有39个，已被定位但未分离到基因的有24个。

2002年本发明人从山东省遗传病调查中收集到一个近亲婚配导致的ARNSHL耳聋家系。我们在排除已知耳聋基因的基础上，利用纯合子定位法，将该家系耳聋基因定位于17q11.2-12的D17S1850和D17S1818之间5.07cM区域。

该基因的发现将有助于对耳聋发生机制的进一步研究，为耳聋的基因诊断和预防等提供帮助。

发明内容

2001年收集到山东临沂一耳聋家系，经临沂市人民医院协助确诊为非综合征性耳聋。家系图如图1。在此基础上，发明人利用外显子组测序技术，对患者进行分析，在位于候选区域内的TMEM132E基因(transmembrane protein 132E)第7外显子检测到一个错义突变，该突变被进一步证实在家系中与耳聋症状共分离；正常群体中分析排除是SNP多态位点；突变位点氨基酸在多物种进化高度保守。这些结果提示TMEM132E基因是该山东临沂ARNSHL耳聋家系的致病基因，而且是一个新的耳聋致病基因。

在第一方面中，本发明涉及突变的TMEM132E基因，该基因与野生型TMEM132E基因相比有一个或多个有义突变。

有义突变是造成TMEM132E基因编码氨基酸序列变化的突变，特别是引起TMEM132E蛋白功能变化的突变。所述功能变化，包括功能增强、减弱或消失。

在一个实施方案中，本发明涉及TMEM132E基因第420位密码子CGA→CAA，导致其编码蛋白的第420位氨基酸由精氨酸→谷氨酰胺（p.R420Q，表示蛋白质序列第420位由R变成Q）。

在一个实施方案中，突变TMEM132E基因为SEQ ID NO:1的序列表示。

在第二方面中，本发明的突变TMEM132E蛋白，该蛋白与野生型相比有一个或多个氨基酸变化。

优选地，所述一个或多个氨基酸变化引起TMEM132E蛋白功能变化。所述功能变化，包括功能增强、减弱或消失。

在一个实施方案中，本发明涉及TMEM132E蛋白第420位氨基酸由精氨酸→谷氨酰胺（p.R420Q）。

在另一个实施方案中，突变TMEM132E蛋白为SEQ ID NO:2的序列表示。

在第三方面中，本发明涉及一种检测耳聋或阴性携带者的方法，所述方法包括检测受试者的TMEM132E基因或TMEM132E蛋白中是否存在突变，如果有纯合突变位点，则所述受试者被鉴定为患有耳聋，如果有杂合突变位点，则所述受试者被鉴定为耳聋阴性携带者。

在一个实施方案中，本发明的检测耳聋或阴性携带者的方法包括，获得TMEM132E基因的部分或全长基因序列并进行测序的步骤。优选地，获得TMEM132E基因的部分或全长基因序列通过PCR扩增进行。优选地，所述测序使用测序仪进行。

优选突变是有义突变，即造成TMEM132E基因编码氨基酸序列变化的突变，特别是引起TMEM132E蛋白功能变化的突变。所述功能变化，包括功能增强、减弱或消失。