[发明专利]一种肝靶向高密度脂蛋白类似物纳米粒及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于生物药物制剂领域,涉及高密度脂蛋白类似物纳米粒，具体涉及一种肝靶向高密度脂蛋白类似物纳米粒及其制备方法和用途。

背景技术:

靶向给药是目前药剂学领域的研究热点之一，但多年来转化为产品的研究成果极为少见，其中关键问题之一就是遭遇的药物载体材料的研究瓶颈。因此研究开发新型给药系统载体材料显得尤为重要，其中，脂蛋白由于自身的结构及生理特性成为目前载体材料的研究热点。

现有技术公开了脂蛋白是内源性物质，可彻底生物降解，不引起免疫反应，也不被网状内皮系统快速清除，因此其作为药物载体有诸多优势：1）内源性主动靶向，通过受体介导被细胞吸收与内吞；2)是天然成分并具有相对较长的半衰期；3)颗粒体积小，直径在纳米级范围，易从血管内扩散到血管外；4)大容量脂核可作为疏水性药物储存的场所，避免所在药物与血浆中成分相互作用而分解破坏。其中由于高密度脂蛋白（high-density lipoprotein HDL）的特殊功能，有望成为新型靶向载体材料。

高密度脂蛋白作为肝靶向载体，高密度脂蛋白（high-density lipoprotein HDL）是血浆中的重要脂蛋白，其生理作用是摄取肝外细胞多余胆固醇并转变成胆固醇酯（CE）贮存于脂核，通过血液运送到肝脏，这个过程称为“胆固醇逆向转运”。该途径是通过肝细胞膜上的特异性受体完成的，Krieger等发现的B族I型清道夫受体（scavenger receptor class B type I,SR-BI）是目前已阐明一级结构的脂蛋白受体中唯一能真正介导细胞与HDL的受体。HDL颗粒通过肝受体途径内吞入肝细胞内，载脂蛋白与核心胆固醇酯分离，胆固醇酯被肝细胞选择性摄取留在胞内，载脂蛋白通过逆向胞饮分泌到胞外。可见HDL胆固醇（酯）吸收的途径是非溶酶体途径，这样可防止被包裹的药物受到溶酶体酶破坏。有关研究表明，HDL组成成分为载脂蛋白AI(apoA-I,约占70％），且HDL“胆固醇逆向转运”功能主要是载脂蛋白与肝细胞膜上受体作用，使肝细胞选择性摄取HDL中胆固醇酯来完成的，对HDL特异性受体SR-BI进一步研究表明：SR-BI与HDL2,HDL3,apoA/phospholiod圆盘状颗粒和无脂载脂蛋白有相同结合力，说明SR-BI是和载脂蛋白结合而不是与HDL中的脂质结合，那么理论上说载脂蛋白可作为肝靶向载体材料。以载脂蛋白作为载体，除了具有脂蛋白作为载体的优势外，还具备其独特的优势：载脂蛋白受体主要存在于肝细胞膜上，主动靶向性更明确；载脂蛋白本身为血液中成分，生物相容性好；载药系统被内吞至肝细胞内而不是经溶酶体途径，避免了药物被溶酶体破坏；在肝细胞内载脂蛋白与药物分离，药物被肝细胞选择性摄取留在胞内，载脂蛋白通过逆向胞饮分泌到胞外，参与胆固醇代谢，降低心血管疾病风险。因此载脂蛋白作为肝靶向载体将对肝脏疾病的靶向治疗提供有力武器。

但目前从人血浆中获得HDL还存在以下主要问题：1）血浆来源困难及血液污染问题；2）超速离心分离HDL成本高。以载脂蛋白作为载体，其来源同样面临HDL来源及血缘污染问题的困扰。

发明内容

本发明的目的是提供一种高密度脂蛋白类似物纳米粒，尤其涉及一种肝靶向高密度脂蛋白类似物纳米粒及其制备方法和用途。本发明的高密度脂蛋白类似物纳米粒能提高药物在肝组织的浓度，降低药物对其他组织的损伤，延长药物半衰期，降低用药量或延长给药间隔。

本发明采用基因工程技术利用毕赤酵母表达的重组人源载脂蛋白作为靶向载体，模拟体内HDL组成及形成过程，与药物、卵磷脂利用硫酸铵梯度法制备成高密度脂蛋白（HDL）类似物纳米粒。所述的纳米粒是以人源载脂蛋白为靶向载体的肝靶向纳米粒。

本发明进一步将毕赤酵母表达的人源载脂蛋白分离纯化后，与抗肿瘤药物/抗乙肝药物、卵磷脂制备成类似HDL的复合物。

具体而言，本发明的肝靶向高密度脂蛋白类似物纳米粒，其特征在于，由重组人源载脂蛋白与卵磷脂、药物按1~10：10：1~5质量比组成肝靶向高密度脂蛋白类似物纳米粒，其中，所述的重组人源载脂蛋白为靶向载体，纳米粒中不含胆固醇。

所述的高密度脂蛋白类似物纳米粒粒径为20-150nm。

本发明中，所述的重组人源载脂蛋白包括apoAI、apoAII及apoE（选自本领域技术人员知悉的重组人源载脂蛋白）；

所述的药物为水溶性、脂溶性且具有抗肝癌、肝炎、肝纤维化的药物。