[发明专利]检测菌体活细胞的方法及其应用以及引物与试剂盒

权利要求书

1.一种检测待测样品中的菌体的活细胞的方法，所述待测样品为含有或不含有上述菌体的活细胞的悬浊液，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）将所述待测样品与叠氮溴化丙锭接触，相对于每ml的所述待测样品，叠氮溴化丙锭的用量为65-75μg，优选为68-72μg，所述接触包括依次进行暗处理和光处理；对接触后的产物进行提取DNA的操作，得到DNA样品；

（2）在能特异性地使所述菌体的DNA得到扩增的条件下，对所述DNA样品进行PCR扩增的操作，获得扩增产品；

（3）根据所述扩增产品中菌体DNA的扩增产物的量判断待测样品中菌体活细胞的数量，其中，所述菌体DNA的扩增产物的量越多，则指示待测样品中菌体活细胞的数量越多。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述暗处理的条件包括光照强度在0.01lux以下、温度为20-30℃和时间为2-10min；所述光处理的条件包括光照强度为5×10³-1.01×10⁴lux、温度为0-10℃和时间为2-6min。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述菌体为长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）。

4.根据权利要求1或3所述的方法，其中，所述菌体为长双歧杆菌BBMN68菌株（Bifidobacterium longum subsp.longum BBMN68），该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.2265。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述PCR扩增所使用的引物包括SEQ ID NO:1所示的正向引物和SEQ ID NO:2所示的反向引物。

6.根据权利要求1、4或5中任意一项所述的方法，其中，所述待测样品中菌体的活细胞的量在10³-10¹⁰CFU/ml范围内。

7.一种引物，其特征在于，该引物包括SEQ ID NO:1所示的正向引物和SEQ ID NO:2所示的反向引物。

8.一种检测待测样品中的菌体的试剂盒，该试剂盒包括PCR扩增试剂和引物，其特征在于，所述菌体为长双歧杆菌BBMN68菌株（Bifidobacterium longum subsp.longum BBMN68），该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.2265，所述引物包括SEQ ID NO:1所示的正向引物和SEQ ID NO:2所示的反向引物。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括叠氮溴化丙锭和DNA提取试剂。

10.权利要求1-7中任意一项所述的方法在检测肠道内容物的菌体活细胞数中的应用。