[发明专利]一种同时测定酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的方法

说明书

技术领域

本发明采用反相高效液相色谱法同时检测酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的定量分析方法，实现了对酒花中α-酸、β-酸中六种主要异构体和异α-酸中三种异构体的同时测定。本发明属于化学分析检测领域

技术背景

酒花是酿造啤酒的重要原料，其α-酸和β-酸既是其主要的风味物质，又是酒花中抑菌、防杂菌污染的主要物质。酒花的质量是影响啤酒质量---口感、风味及稳定性的重要因素之一，而其中最关键问题就是酒花中α-酸、β-酸的含量及其新鲜度的准确测定与辨别。α-酸主要包括葎草酮（humulone）、合葎草酮（cohumulone）、加葎草酮（adhumulone）三种异构体,β-酸主要包括蛇麻酮（lupulone）、合蛇麻酮（colupulone）、加蛇麻酮（adlupulone）三种异构体。α-酸在加热、稀碱或光照下易发生异构化形成异α-酸，异α-酸是啤酒苦味的主要物质，它虽α-酸苦，但苦味更柔和。在麦汁煮沸1.0-1.5h约有40%-60%α-酸转化成异α-酸。异α-酸主要有异合α-酸、异α-酸和异加α-酸。

目前对α-酸、β-酸和异α-酸的检测方法是各自独立的，实验操作重复而浪费时间。还没有一种检测方法可以有效地同时分析测定3种α-酸、3种β-酸和3种异α-酸9种物质，既节省时间又能有效的分离。从而在酒花异构颗粒和异构浸膏的生产过程，检测酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的变化关系，为生产工艺提供理论指导。同时该检测方法也可应用于麦汁煮沸过程不同品种酒花的α-酸与异α-酸的动力学变化的研究。

发明内容

本发明的目的是提供一个用反相高效液相色谱方法同时测定酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的方法。在添加一定量EDTANa₂，实现3种α-酸、3种β-酸和3种异α-酸9种物质的同时测定。该方法提高液相检测的效率，节省时间，对九种化合物都能获得较好的分离效果。

本发明测定酒花和麦汁中α-酸、β-酸和异α-酸的方法包括如下步骤：

a.酒花样品制备：对于酒花颗粒制品，将其磨成粉末状，称取样品5.0g，置于250mL具塞锥形瓶中，用10-30mL甲醇和70-100mL乙醚萃取，于恒温20℃摇床振荡30min，加入0.1mol/L盐酸溶液30-50mL，再振荡30min，静置30min使其分层。取上层乙醚层5mL，用甲醇定容至50mL，充分均匀，用0.45μm有机滤膜过滤，存于样品瓶中，准备进样。对于酒花浸膏样品，准确称取0.1g，置于50mL烧杯中，用40mL甲醇溶解，置于超声波水浴10-20min，转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容，充分混匀。用0.45μm有机滤膜过滤，存于样品瓶中，准备进样。

b.标样制备：取0.0200g异α-酸用25mL色谱级甲醇溶于50mL烧杯；0.2000gα-酸和β-酸浸膏标样，用20mL色谱级甲醇充分溶解，定容于50mL棕色容量瓶中。取10mL于50mL容量瓶，再倒入异α-酸标样溶解液，用甲醇定容。充分混匀，用0.45μm有机滤膜过滤，存于样品瓶中，准备进样。

c.色谱条件如下：

色谱柱：EC 250/4Nuclesoil 100-5C18

洗脱条件：流动相：有机B相为乙腈；无机A相为含有磷酸(85%)0.1%、0.2mM EDTANa₂的水溶液。本发明采用梯度洗脱方法，洗脱程序为：0-30min，0%B-60%B；30-32min，60%B-70%；32-50min，70%B-75%B；50-55min，75%B-60%B。

进样体积10μL，流速1.0mL/min，柱温30℃.

检测波长：异α-酸的检测波长270nm，α-酸和β-酸的检测波长315nm。

本发明同时可将酒花中α-酸、β-酸6种主要异构体和异α-酸3种主要异构体共9种物质一次性分离，操作简单、准确可靠。

附图说明

图1酒花浸膏样品色谱图

1.异合葎草酮 2.异葎草酮 3.异加葎草酮 4.合葎草酮 5.葎草酮 6.加葎草酮 7.合蛇麻酮 8.蛇麻酮 9.加蛇麻酮

图2酒花颗粒样品色谱图

1.异合葎草酮 2.异葎草酮 3.异加葎草酮 4.合葎草酮 5.葎草酮 6.加葎草酮 7.合蛇麻酮 8.蛇麻酮 9.加蛇麻酮

具体实施方式

实施例1