[发明专利]一种能够检测基因单核苷酸多态性的功能蛋白

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物类功能蛋白，尤其涉及一种能够检测基因单核苷酸多态性的功能蛋白。

背景技术

聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）的发明具有划时代的意义，使得人们可以在体外有目的地无限扩增特定的核酸片段。其原理类似于DNA的体内复制，只是在离心管中给DNA的体外合成提供一种合适条件。经过多年的发展，这一技术已经非常成熟，同时衍生了其它很多的相关技术：如荧光定量PCR技术等，现在已是分子生物学研究和临床诊断领域中最重要和最常用的技术；其中PCR仪的出现则使该技术实现了自动化，使得PCR的技术应用更加广泛，例如在诊断遗传性疾患、检测临床标本中病原体的核酸、对法医标本作遗传学鉴定，以及分析激活癌基因中的突变情况等方面都得到了广泛的应用。

由于现有的整个扩增时间比较长、扩增过程也比较复杂，结果不容易重复，仪器昂贵且不方便携带，如某传染病暴发不能及时有效地诊断相关病原体，拖延了时间，期间疫情可能将无法控制，导致局面失控，造成不必要的损失，所以现有核酸扩增技术所使用的仪器装备在新发突发性传染病的检测方面受到了限制。

所以开发一种可以检测基因单核酸多态性的功能蛋白在对新发突发传染病病原体检测是非常紧迫和必要的，为新发突发性传染病的治疗和疫情控制赢得宝贵的时间，这将是未来一个主要的发展方向。

发明内容：

本发明的目的就在于克服现有技术存在的缺点和不足，提供一种能够检测基因单核酸多态性的功能蛋白。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一、能够检测基因单核苷酸多态性的功能蛋白（简称功能蛋白）

DNA错配修复(Mismatch Repair，MMR)是细胞复制后的一种修复机制，具有维持DNA复制保真度、控制基因变异的作用。该修复机制首先是在原核生物大肠杆菌中发现的，随后在真核生物及人类细胞中也相继发现与错配修复密切相关的同源基因。近年来的大量研究表明，MMR基因的突变或缺陷将导致复制后错配修复功能的丧失，增加细胞自发突变的频率，随着基因突变的不断放大积累，使大量错误信息遍布于整个基因组，最终导致肿瘤的发生。SNP（Single Nucleotide Polymorphisms，单核苷酸多态性）酶蛋白是生物体内MMR修复机制的重要成分,具有单独识别、结合含有错配或未配对碱基核苷酸链的特性，是一种极具潜力的研究基因组多态性、检测及定位突变的功能蛋白。

具体地说，本功能蛋白是一种能够检测基因单核苷酸多态性的功能蛋白，其氨基酸序列如SEQ NO.1所示。

二、功能蛋白的制备方法

本功能蛋白的制备方法包括下列步骤：

①合成SNP酶目的基因，构建到pET28a表达载体中；

②将含有目的基因的表达载体，通过CaCl₂法转化入宿主菌BL21中；

③筛选出含重组子的转化菌落，提取质粒DNA作限制性内切核酸酶图谱，DNA序列测定，确定无误后进行下一步；

④表达载体的原核启动子为tac，37℃培养细菌3小时达到对数生长期后加IPTG至终浓度为1mmol/L，继续培养3～5h；

⑤取上述培养液1mL，1000g离心，1min，沉淀，加100μL聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后，作SDS-PAGE检测；

⑥通过超声波破碎法裂解细菌，使表达的目的蛋白释放；

⑦通过组氨酸亲和层析柱过滤，纯化得到功能蛋白。

三、功能蛋白的用途

SNP酶蛋白是生物体内MMR系统的重要成分，具有能单独识别、结合含有错配或未配对碱基核苷酸链的特性，是一种极具潜力的研究基因组多态性、检测及定位突变的工具蛋白。

适用于检测基因单核苷酸多态性。

本发明具有下列优点和积极效果：

①对病原体变异位点的快速检测；

②对人类基因单核苷酸多态性位点检测；

③高特异性、高灵敏度；

④成本低廉，无需特殊试剂。

附图说明

图1是SNP酶蛋白表达、纯化后的15％SDS-PAGE电泳图谱，蛋白分子量97KDa；

图2是SNP酶蛋白检测人酒精基因-乙醛脱氢酶基因结果图，图中：

1—突变型无目的条带；

2—野生型有明显的目的条带，

M（Marker）—DL2000。

具体实施方式：

下面结合附图和实施例详细说明：