[发明专利]一种能够检测基因单核苷酸多态性的功能蛋白无效
| 申请号： | 201210190611.8 | 申请日： | 2012-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN102816744A | 公开（公告）日： | 2012-12-12 |
| 发明（设计）人： | 项荣 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00;C12N15/52;C12N15/70;C12Q1/68;C12Q1/25 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 黄瑞棠 |
| 地址： | 430073*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 能够 检测 基因 核苷酸 多态性 功能 蛋白 | ||
【权利要求书】：
1.一种能够检测基因单核苷酸多态性的功能蛋白，其特征在于：
氨基酸序列如SEQ NO.1所示。
2.按权利要求1所述的一种能够检测基因单核苷酸多态性的功能蛋白的制备方法，其特征在于包括下列步骤：
①合成SNP酶目的基因，构建到pET28a表达载体中；
②将含有目的基因的表达载体，通过CaCl2法转化入宿主菌BL21中；
③筛选出含重组子的转化菌落，提取质粒DNA作限制性内切核酸酶图谱，DNA序列测定，确定无误后进行下一步；
④表达载体的原核启动子为tac，37℃培养细菌3小时达到对数生长期后加IPTG至终浓度为1mmol/L，继续培养3～5h；
⑤取上述培养液1mL，1000g离心，1min，沉淀，加100μL聚丙烯酰胺凝胶电泳上样缓冲液后，作SDS-PAGE检测；
⑥通过超声波破碎法裂解细菌，使表达的目的蛋白释放；
⑦通过组氨酸亲和层析柱过滤，纯化得到功能蛋白。
3.按权利要求1所述的一种能够检测基因单核苷酸多态性的功能蛋白的用途，其特征在于：
适用于检测基因单核苷酸多态性。
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