[发明专利]一种脊尾白虾微卫星标记的3重PCR检测方法有效
| 申请号： | 201210190585.9 | 申请日： | 2012-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN102676689A | 公开（公告）日： | 2012-09-19 |
| 发明（设计）人： | 刘萍;李健;贾舒雯 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 青岛联智专利商标事务所有限公司 37101 | 代理人： | 杨秉利 |
| 地址： | 266071 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 脊尾白虾微 卫星 标记 pcr 检测 方法 | ||
1.一种脊尾白虾微卫星标记的3重PCR检测方法，它包括：(1)设计并合成3重PCR引物；(2) 提取基因组DNA；(3)3重PCR反应；(4) 检测PCR产物；其特征在于所述3重PCR反应包括3重PCR反应体系和3重PCR反应程序，所述3重PCR反应体系的引物为EC007、EC054和EC709的组合，所述各引物序列如下：
EC007 F: AATATGCAGTGGCAAGCT；
R:TTCCCATCATCTTCCTCC；
EC054 F: CTTTGCCCCTACTAACTGTTGC；
R:ACGACTGACCTGAGAAATCCCT；
EC709 F: GGCTGTCCCTTGGAACTA；
R:ACGAAATCCGAATAACCC。
2.根据权利要求1所述的一种脊尾白虾微卫星标记的3重PCR检测方法，其特征在于所述3重PCR反应体系为：10×Buffer 2.0μL；25mmol/L MgCl2 1.2μL；10mmol/L dNTP 1.5μL；所述5mmol/L引物EC007: F: 1.5μL + R:1.5μL、EC054: F: 05μL + R:0.5μL、EC709：F: 1.5μL + R:1.5μL；50ng/μL脊尾白虾基因组DNA 2.0μL；5U/μL Taq 聚合酶0.2μL；ddH2O补充至20μL。
3.根据权利要求1所述的一种脊尾白虾微卫星标记的3重PCR检测方法，其特征在于所述PCR反应程序为：95 ℃预变性5min；95℃变性45 s，56℃退火45 s，72℃延伸45 s，共进行25次循环；最后72℃延伸5min；4℃保存并结束反应。
4.根据权利要求1所述的一种脊尾白虾微卫星标记的3重PCR检测方法，其特征在于采用琼脂糖凝胶电泳方法检测PCR产物。
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