[发明专利]一种提高动物体外胚胎囊胚发育率的方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物繁殖育种领域，具体地涉及一种提高动物体外胚胎囊胚发育率的方法。 

背景技术

胚胎体外生产技术不仅能提高动物的繁殖力，还能降低生产成本，并为以胚胎为对象的研究提供大量材料。但是，如何提高囊胚发育率是此技术的难点。目前，国内外提高牛体外囊胚发育率技术主要从改进培养液成分和培养环境两方面入手。例如，在卵母细胞成熟培养液中添加胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸纳(ITS)或者在常规胚胎培养液中添加白血病生长抑制因子(LIF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)和褪黑素(MT)等都可以提供牛的囊胚发育率。因此，市场上不断出现新的胚胎培养液，如美国Millipore和Caisson公司推出不同的SOF和KSOM。目前国内外有关提高体外囊胚发育率方法的技术有：(1)一种提高水牛体外胚胎生产效率的方法:通过向培养液中添加10μL/mL和20μL/mL胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)进行体外成熟、体外培养能提高水牛卵母细胞的体外成熟率和囊胚发育率；(2)一种犊牛体外胚胎培养液：在商品化的胚胎培养液G2.5的基础上加入1000u/mL的白血病生长抑制因子和10ng/mL的碱性成纤维生长因子，能够显著提高人废弃胚胎的囊胚发育率和胚胎干细胞的建系效率；早期胚胎体外发育培养液对犊牛体外胚胎进行培养，可以获得较高的囊胚发育率。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高动物体外胚胎囊胚发育率的方法。 

本发明的另一目的在于提供一种动物胚胎发育培养液。 

本发明提供的提高动物体外胚胎囊胚发育率的方法，是在动物胚胎发育培养液中添加I型干扰素。 

具体地，本发明提供的提高动物体外胚胎囊胚发育率的方法，是在动物胚胎发育培养液中添加rbIFN-τ。 

所述的rbIFN-τ是本发明前期自行研制的重组蛋白，其制备方法已公开在专利号为200710121136.8的中国发明专利中，授权公告号为CN101116640B。 

所述的动物胚胎发育培养液为本领域常用的胚胎发育培养液，如孤雌激活的胚胎发育培养液采用SOFaa+8mg/mLBSA的培养液或SOFaa+8mg/mL BSA；体外受精胚胎发育培养液选用CR1aa，其配方参见本申请附录或文献【Ushijima H,Yamakawa H,Nagashima H.Cryopreservation of bovine pre-morula-stage in vitro matured/in vitro fertilized embryos after delipidation and before use in nucleus transfer.Biol Reprod 1999,60:534-539.】。 

本发明提供的提高动物体外胚胎囊胚发育率的方法是在孤雌胚胎激活后的第4天或体外受精卵受精后的第4天的胚胎发育培养液中添加rbIFN-τ。 

进一步地，添加rbIFN-τ的终浓度为100~200ng/mL。 

优选地，在胚胎发育培养液中添加终浓度为100ng/mL的rbIFN-τ。 

其中，开始添加rbIFN-τ后，每隔48h更换体积百分比为原培养液50%的含rbIFN-τ培养液。 

进一步地，上述培养条件为38.5℃，5%CO₂和100%湿度。 

本发明提供的提高动物体外胚胎囊胚发育率的方法适用动物为牛、羊。 

本发明还提供了一种含有rbIFN-τ的动物胚胎发育培养液。 

进一步地，上述动物胚胎发育培养液的rbIFN-τ的有效浓度为100~200ng/mL。 

进一步地，上述动物胚胎发育培养液的rbIFN-τ的有效浓度为100ng/mL。 

本发明提供了rbIFN-τ在动物体外胚胎培养中的应用。 

本发明通过向胚胎发育培养液中添加rbIFN-τ进行胚胎的体外培养，能显著的提高孤雌激活胚胎与体外受精胚胎的发育能力，本发明方法比常规培养液培养下的囊胚率提高7%~13%，囊胚孵化率也显著高于常规培养液培养下的囊胚孵化率。本发明提供的提高动物体外胚胎囊胚发育率的方法能够显著提高了牛体外胚胎早期发育能力，从而提高了牛胚胎体外生产效率，降低了生产成本，同时为以胚胎为材料的研究和生产提供了大量优质的胚胎。 

具体实施方式

以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。