[发明专利]抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）测定试剂盒（发色底物法）有效
| 申请号： | 201210189573.4 | 申请日： | 2012-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN102690862A | 公开（公告）日： | 2012-09-26 |
| 发明（设计）人： | 谢永华 | 申请（专利权）人： | 上海太阳生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/56 | 分类号： | C12Q1/56;C12P19/12 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 冯琼;李玉秋 |
| 地址： | 201108 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗凝 at 测定 试剂盒 发色底物法 | ||
1.一种抗凝血酶III活性检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包含肝素衍生物、凝血酶，所述R2试剂包含发色底物试剂；所述肝素衍生物是由肝素通过肝素酶II降解，从肝素上裂解出一个或多个不饱和双糖而得。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述肝素衍生物的制备方法包括以下步骤：
步骤1：将肝素溶于pH值为6.0-8.0的磷酸盐缓冲液，得肝素母液；
步骤2：将肝素酶II加入上述肝素母液中，所得混合物于25-40℃反应20-40小时；
步骤3：将上述反应后的混合物于80-100℃灭活肝素酶II。
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤1中所述肝素为人、牛或猪肝素中的任意一种。
4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤1中所述肝素在所述磷酸盐缓冲液中的浓度为1000～4000U/ml。
5.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤1中所述肝素在所述磷酸盐缓冲液中的浓度为2000U/ml。
6.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤2所述肝素酶II与肝素母液中所述肝素的量之比为1IU：5000～10000U。
7.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤2所述肝素酶II与肝素母液中所述肝素的量之比为1IU：8000U。
8.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤2还包括用紫外分光光度计分别检测所述反应前、后，反应混合物在232nm处的吸光度值，将所述反应后的混合物吸光度较反应前增强5%-20%认定为生成了所述肝素衍生物。
9.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，步骤3还包括将所述肝素衍生物从反应混合物中分离纯化的步骤。
10.如权利要求1-9任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述R1试剂、R2试剂为冷冻干燥试剂。
11.如权利要求10所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括R1复溶试剂，所述R1复溶试剂包含无机盐和缓冲液。
12.如权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述无机盐为氯化钠或氯化钾。
13.如权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述肝素衍生物的工作浓度为0.25-3.0U/ml。
14.如权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述肝素衍生物的工作浓度为1.6U/ml。
15.如权利要求11-14所述的试剂盒，其特征在于，所述凝血酶的工作浓度为5-20IU/ml。
16.如权利要求11-14所述的试剂盒，其特征在于，所述凝血酶的工作浓度为10.9IU/ml。
17.如权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述氯化钠或氯化钾的工作浓度为0.1M-0.3M。
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