[发明专利]鼠源性单克隆抗体3D8识别的汉滩病毒糖蛋白中和表位肽及应用

权利要求书

1.一种鼠源性单克隆抗体3D8识别的汉滩病毒糖蛋白中和表位肽，其特征在于，其氨基酸序列为⁸⁸²GFLCPEFPGSFRKKC⁸⁹⁶。

2.如权利要求1所述的鼠源性单克隆抗体3D8识别的汉滩病毒糖蛋白中和表位肽，其特征在于，其中，氨基酸序列中的⁸⁸⁵C，⁸⁹³R，⁸⁹⁴K，⁸⁹⁵K和⁸⁹⁶C为其关键氨基酸残基序列。

3.权利要求1所述的鼠源性单克隆抗体3D8识别的汉滩病毒糖蛋白中和表位肽的检测方法，其特征在于，首先合成281条重叠多肽，每条合成肽长度为15个氨基酸，相邻肽重叠11个氨基酸，通过间接ELISA法和Dotblot法进行肽扫描，检测合成肽对3D8单抗的反应性，最终将该表位肽精确定位为：⁸⁸²GFLCPEFPGSFRKKC⁸⁹⁶，其中，⁸⁸⁵C，⁸⁹³R，⁸⁹⁴K，⁸⁹⁵K和⁸⁹⁶C为其关键氨基酸残基。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的间接ELISA法，包括如下步骤：

孔ELISA板上包被合成肽，包被浓度10μM，包被量为1nmol，包被条件为4℃72小时以上，封闭前在37℃继续包被2小时；

用PBS-T洗涤2次后，每孔加入300μL含5%FCS的抗体稀释液PBS-T，37℃封闭2小时；

用上述抗体稀释液1∶2500稀释3D8单抗，每孔加入100μL，37℃反应1.5小时；

用PBS-T洗涤3次后，加入二抗，用上述抗体稀释液1∶2500稀释HRP标记的羊抗小鼠IgG至1∶2500，每孔加入100μL，37℃反应1小时；

PBS-T洗涤3次后显色，每孔加入100μLTMB，反应45~60分钟，每孔加入50μL 2M H₂SO₄终止反应；

用酶标仪在450nm处测定OD值。

5.如权利要求3所述方法，其特征在于，所述的Dot blot法包括如下步骤：

在NC膜上标记点样位置；

按顺序滴加待测肽1nM于各点样位置，待其自然干燥；

将点样后的NC膜浸入含10%FCS的抗体稀释液TBS-T中，室温封闭1小时~2小时；

封闭后的NC膜与3D8单抗（用上述的抗体稀释液1∶4000稀释）4℃过夜反应；

用TBS-T洗涤NC膜5次，每次10分钟；

NC膜孵育二抗，用上述抗体稀释液1∶2500稀释HRP标记的羊抗小鼠IgG，室温避光反应1小时；

TBS-T洗涤NC膜5次，每次10分钟，ECL成像。

6.权利要求1所述的鼠源性单克隆抗体3D8识别的汉滩病毒糖蛋白中和表位肽用于制备汉滩病毒多肽疫苗的应用，或用于制备治疗肾综合征出血热的药物的应用。

7.权利要求1所述的鼠源性单克隆抗体3D8识别的汉滩病毒糖蛋白中和表位肽用于研究3D8中和单克隆抗体治疗肾综合征出血热的机制，或作为靶蛋白用于开发汉滩病毒76-118株相关诊断试剂盒。