[发明专利]小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用淡水鱼皮提取小分子胶原蛋白肽的制备领域，特别涉及一种利用控制酶解法、膜分离法、活性炭结合树脂脱色法制备无色无味小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法。

背景技术

一般，小分子胶原蛋白肽可以作为有效成分被广泛应用于医药、高档化妆品、保健食品等与人体健康相关的行业。目前，国内外用于制备小分子胶原蛋白肽的原料主要来源于猪皮和牛皮。然而，由于对疯牛病、猪口蹄疫的恐慌以及宗教信仰等原因，以水产加工废弃物尤其利用鱼皮制备小分子胶原蛋白肽不断受到关注。据报道，小分子胶原蛋白肽易于消化吸收，具有保护胃粘膜防止胃溃疡，促进钙吸收防治骨质疏松，促进皮肤胶原代谢，抑制血压上升，以及降低血清中胆固醇含量等多方面的生理功能，导致市场对胶原蛋白的需求量不断增加。

目前，利用以鱼皮为原料制备小分子胶原蛋白肽在国内外已经有了大量的研究和报道。在胶原蛋白肽的提取方法中，利用蛋白酶对胶原蛋白进行酶解不仅效率高、而且产品的分子量分布容易控制，因此酶解提取法被广泛应用于工业化生产。然而，由于蛋白酶价格昂贵，如果没有对提取工艺进行合理设计，不仅需要添加大量的蛋白酶，而且酶解时间长，造成生产成本偏高，产品分子量分布广。另一方面，利用鱼皮制备的小分子胶原蛋白肽都存在颜色深、带有鱼腥味，导致应用范围受到限制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生产周期较短、生产成本较低的无色无味小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法。

利用控制酶解法提取无色无腥味的小分子鱼皮胶原蛋白肽的制备方法，它是以淡水鱼的鱼皮为原料，将其制备成小分子胶原蛋白肽的方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是： 

本发明是一种小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法，它包括以下步骤：(1) 粗胶原蛋白的制备：以淡水鱼的鱼皮为原料，用2-5倍原料重的含有20% (v/v)无水乙醇的碱性溶液浸泡12-24h去除杂蛋白和脂肪后用清水漂洗至中性，利用5-10倍原料重的酸性溶液搅拌浸泡1-3h，再用清水漂洗至pH为3-5后，磨碎制备成粗胶原蛋白；(2)胶原蛋白的加热水解：对磨碎的粗胶原蛋白加热水解；(3) 胶原蛋白的内切酶酶解：加热水解的胶原蛋白溶液降温至45-60°C，将溶液的pH调整至8.0-9.0，加入0.02-0.1% (w/w)原料重量的内切酶对胶原蛋白进行酶解；(4) 胶原蛋白的外切酶酶解：将内切酶酶解的胶原蛋白溶液的pH调整至5.0-6.0，加入0.1-0.5% (w/w)原料重量的内切酶进行酶解制备成胶原蛋白肽溶液；(5)蛋白酶的回收和利用：胶原蛋白肽溶液经过超滤膜，将蛋白酶和未完全酶解的高分子胶原蛋白截留并添加到步骤(4)中继续使用；(6)灭酶、脱盐、浓缩：利用90-100°C对超滤获得的滤液加热5-15min进行灭酶，然后利用纳滤膜进行脱盐、浓缩；(7)脱色、脱腥：在步骤(6)处理获得的小分子胶原蛋白肽浓缩液中加入溶液重量的0.5-2.0%(w/w)的活性炭进行脱色脱腥，接着利用碟式离心机去除活性炭，再利用树脂脱色脱腥；(8) 小分子胶原蛋白肽粉末的制备：将步骤(7)脱腥脱色的胶原蛋白肽溶液通过喷雾干燥，制备成小分子胶原蛋白肽粉末。

在步骤(1)中，所述的碱性溶液浸泡条件为：碱性溶液为0.01-0.05 M NaOH溶液；浸泡温度为4-20°C。

在步骤(1)中，所述的酸性溶液浸泡条件为：酸性溶液为0.05-0.20 M HCl溶液；浸泡温度为4-20°C。

在步骤(2)中，所述的胶原蛋白加热水解的条件为：在90-100 °C下加热30-60 min。

在步骤(3)中，所述的内切酶为：胶原蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶中的一种或组合。

在步骤(3)中，所述的胶原蛋白内切酶酶解条件为：在45-55 °C下酶解1-4 h。

在步骤(4)中，所述的外切酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶中的一种或组合。

在步骤(4)中，所述的胶原蛋白外切酶酶解条件为：在45-55 °C下酶解1-4 h。

在步骤(5)中，所述的超滤膜的规格为：截留分子量为2000-5000道尔顿。

在步骤(6)中，所述的纳滤膜的规格为：截留分子量为200道尔顿。

在步骤(7)中，所述的活性炭脱色脱腥条件为：胶原蛋白肽溶液的pH调整至4.5-6.0，在30-40°C下保温15-60min。

在步骤(7)中，所用的脱色脱腥树脂可以为离子交换树脂、吸附树脂或鳌合树脂中的任一种。