[发明专利]小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法

权利要求书

1.一种小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：(1) 粗胶原蛋白的制备：以淡水鱼的鱼皮为原料，用2-5倍原料重的含有20% (v/v)无水乙醇的碱性溶液浸泡12-24h去除杂蛋白和脂肪后用清水漂洗至中性，利用5-10倍原料重的酸性溶液搅拌浸泡1-3h，再用清水漂洗至pH为3-5后，磨碎制备成粗胶原蛋白；(2)胶原蛋白的加热水解：对磨碎的粗胶原蛋白加热水解；(3) 胶原蛋白的内切酶酶解：加热水解的胶原蛋白溶液降温至45-60°C，将溶液的pH调整至8.0-9.0，加入0.02-0.1% (w/w)原料重量的内切酶对胶原蛋白进行酶解；(4) 胶原蛋白的外切酶酶解：将内切酶酶解的胶原蛋白溶液的pH调整至5.0-6.0，加入0.1-0.5% (w/w)原料重量的内切酶进行酶解制备成胶原蛋白肽溶液；(5)蛋白酶的回收和利用：胶原蛋白肽溶液经过超滤膜，将蛋白酶和未完全酶解的高分子胶原蛋白截留并添加到步骤(4)中继续使用；(6)灭酶、脱盐、浓缩：利用90-100°C对超滤获得的滤液加热5-15min进行灭酶，然后利用纳滤膜进行脱盐、浓缩；(7)脱色、脱腥：在步骤(6)处理获得的小分子胶原蛋白肽浓缩液中加入溶液重量的0.5-2.0%(w/w)的活性炭进行脱色脱腥，接着利用碟式离心机去除活性炭，再利用树脂脱色脱腥；(8) 小分子胶原蛋白肽粉末的制备：将步骤(7)脱腥脱色的胶原蛋白肽溶液通过喷雾干燥，制备成小分子胶原蛋白肽粉末。

2.如权利要求1所述的小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述的碱性溶液浸泡条件为：碱性溶液为0.01-0.05 M NaOH溶液；浸泡温度为4-20°C。

3.如权利要求1所述的小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述的酸性溶液浸泡条件为：酸性溶液为0.05-0.20 M HCl溶液；浸泡温度为4-20°C。

4.如权利要求1所述的小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述的胶原蛋白加热水解的条件为：在90-100 °C下加热30-60 min。

5.如权利要求1所述的一种小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法，其特征在于在步骤(3)中，所述的内切酶为：胶原蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶中的一种或组合；所述的胶原蛋白内切酶酶解条件为：在45-55 °C下酶解1-4 h。

6.如权利要求1所述的小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法，其特征在于：在步骤(4)中，所述的外切酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶中的一种或组合；所述的胶原蛋白外切酶酶解条件为：在45-55 °C下酶解1-4 h。

7.如权利要求1所述的小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法，其特征在于：在步骤(5)中，所述的超滤膜的规格为：截留分子量为2000-5000道尔顿。

8.如权利要求1所述的小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法，其特征在于：在步骤(6)中，所述的纳滤膜的规格为：截留分子量为200道尔顿。

9.如权利要求1所述的小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法，其特征在于：在步骤(7)中，所述的活性炭脱色脱腥条件为：胶原蛋白肽溶液的pH调整至4.5-6.0，在30-40°C下保温15-60min；所用的脱色脱腥树脂可以为离子交换树脂、吸附树脂或鳌合树脂中的任一种；所述的树脂脱色脱腥条件为：脱色脱腥温度为常温，胶原蛋白肽溶液的pH保持在4.5-6.0，胶原蛋白肽溶液在树脂中停留的时间为15-60min。

10.如权利要求1所述的小分子鱼皮胶原蛋白肽的提取制备方法，其特征在于：所述的淡水鱼为鲢鱼、草鱼、青鱼、鳙鱼或罗非鱼中的一种。