[发明专利]改进的由PiggyBac转座子介导的个体基因突变方法

权利要求书

1.一种用于基因捕获的构建物，其特征在于，所述构建物从5’至3’端包括以下可操作性连接的元件：

piggyBac转座子左臂，RNA剪接受体，启动子，报告基因，翻译终止密码子，RNA剪接供体，piggyBac转座子右臂；

其中，所述的报告基因不带有3’端PolyA终止信号。

2.如权利要求1所述的构建物，其特征在于，在报告基因的3’端，还包括以下依次相连的元件：Loxp，IRES，Loxp。

3.如权利要求1所述的构建物，其特征在于，在报告基因的3’端，还包括以下元件：mRNA不稳定信号；和/或

KOZAK序列。

4.如权利要求1所述的构建物，其特征在于，所述的报告基因是绿色荧光蛋白基因。

5.一种表达转座酶的构建物，其特征在于，所述构建物从5’至3’端包括以下可操作性连接的元件：精原细胞特异性表达启动子，piggyBac转座酶编码基因以及PolyA终止信号。

6.一种用于基因突变的系统，其特征在于，所述系统包括：

(1)权利要求1-4任一所述的用于基因捕获的构建物；和

(2)权利要求5所述的表达转座酶的构建物。

7.一种制备基因组中发生基因插入突变的动物的方法，包括：

(a)将权利要求1-4任一所述的构建物转入到动物受精卵内，将受精卵移植到动物生殖系统中，使动物怀孕，产生转基因阳性的子代动物；

(b)将权利要求5所述的构建物转入到动物受精卵内，将受精卵移植到动物生殖系统中，使动物怀孕，产生转基因阳性的子代动物；

(c)将(a)获得的转基因阳性的子代动物与(b)获得的转基因阳性的子代动物杂交，选择转基因双阳性的子代雄性动物；

(d)将(c)获得的子代雄性动物与雌性动物交配，获得后代，选择报告基因表达阳性的动物，其基因组中发生基因插入突变。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(a)所述的构建物中，所述的报告基因是绿色荧光蛋白；步骤(d)中，报告基因表达阳性的动物在长波紫外光或者蓝光下表体发光。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(b)中，将权利要求5所述的构建物定位插入到动物受精卵的X染色体内；

并且，在步骤(d)之后，还包括步骤：(e)从步骤(d)获得的动物中选择雄性动物，其为不含有外源的转座酶的基因组中发生基因插入突变的动物。

10.一种制备受精卵的方法，包括将权利要求1-4任一所述的用于基因捕获的构建物转入到受精卵内；或

将权利要求5所述的表达转座酶的构建物转入到受精卵内。