[发明专利]三七总皂苷的微生物发酵提取方法

权利要求书

1.三七总皂苷的微生物发酵提取方法，其特征是包括以下步骤：

1）、微生物固态发酵：

将三七根粉与作为营养辅料的麸皮按1.5~4:1的重量比混合后作为发酵基质，将发酵基质进行灭菌，得灭菌后发酵基质；

将pH=7~8、且浓度为0.2 mol/L的磷酸盐缓冲溶液进行灭菌，得灭菌后磷酸盐缓冲溶液；

按照每g发酵基质配用1~1.4ml的pH=7~8、且浓度为0.2 mol/L的磷酸盐缓冲溶液的比例；在灭菌后发酵基质中加入灭菌后磷酸盐缓冲溶液，得发酵底物；

然后在无菌条件下进行以下操作：

按照每g发酵基质配用0.1~0.2 mL枯草芽孢杆菌的菌液的接种量，在发酵底物中加入枯草芽孢杆菌的菌液，搅拌均匀后，于34.8~35.2℃培养90~100h，得发酵曲；

2）、三七总皂苷的提取：

将发酵曲用体积浓度为68~72%的乙醇溶液回流提取，所述乙醇溶液与步骤1）中的发酵基质的用量比为：7.5~8.5ml的乙醇溶液/g发酵基质；回流提取时间为1.2~1.8h；回流提取结束后，离心，分别得首次上清和残渣；

将残渣用体积浓度为68~72%的乙醇溶液回流提取，所述乙醇溶液与步骤1）中的发酵基质的用量比为：4.5~5.5ml的乙醇溶液/g发酵基质；回流提取时间为1.2~1.8h；回流提取结束后，离心，得二次上清；

合并首次上清和二次上清，得三七总皂苷提取液。

2.根据权利要求1所述的三七总皂苷的微生物发酵提取方法，其特征是：所述三七根粉为三七根粉碎至能过40目筛。

3.根据权利要求2所述的三七总皂苷的微生物发酵提取方法，其特征是：所述枯草芽孢杆菌的菌液的制备方法为包括如下步骤：

①、将1 g豆粕渣与pH=7~8、且浓度为0.05 mol/L的磷酸盐缓冲液28~32mL混合，得液体种子发酵培养基，灭菌，得灭菌后液体种子发酵培养基；

②、在无菌条件下，在步骤①所得的灭菌后液体种子发酵培养基中接种1~2环的枯草芽孢杆菌，于140~160rpm、36.8~37.2℃的条件下培养22~26 h；得枯草芽孢杆菌的菌液。

4.根据权利要求1、2或3所述的三七总皂苷的微生物发酵提取方法，其特征是：

所述步骤1）中：

将三七根粉与作为营养辅料的麸皮按7:3的重量比混合；

按照每g发酵基质配用1.2ml的pH=7.5、且浓度为0.2 mol/L的磷酸盐缓冲溶液的比例；在灭菌后发酵基质中加入灭菌后磷酸盐缓冲溶液，得发酵底物；

按照每g发酵基质配用0.15 mL枯草芽孢杆菌的菌液的接种量，在发酵底物中加入枯草芽孢杆菌的菌液。